直擴PCR（Direct PCR）是一種無需核酸提取步驟、可直接對原始生物樣本（如血痕、血卡、唾液斑及現(xiàn)場混合檢材）進行擴增的技術(shù)。該技術(shù)通過簡化操作、提升效率并降低成本，正推動法醫(yī)檢測進入免提取的精準時代，顯著縮短鑒定時間，同時減少樣本損耗與污染風(fēng)險。2024年，美國國家司法研究所的報告明確將直接PCR視為提升現(xiàn)場“痕量DNA”證據(jù)分析速度、簡化流程的關(guān)鍵技術(shù)。
圖示.直擴PCR流程[1]
該技術(shù)的核心在于采用了經(jīng)深度優(yōu)化的高耐受性DNA聚合酶和專用緩沖體系，能夠有效克服血紅素、環(huán)境降解產(chǎn)物及各類常見PCR抑制劑的干擾，從而在復(fù)雜的現(xiàn)場生物檢材中仍能保證擴增的穩(wěn)定性與可靠性。
近岸蛋白HotStart Taq DNA Polymerase III (Glycerol-Free)(Cat. No.: E285-03) ，一款專為多重PCR 和高要求擴增場景設(shè)計的無甘油熱啟動Taq酶。
產(chǎn)品應(yīng)用
基因組分型、司法鑒定、高通量遺傳鑒定分析、多重病原體檢測等。
產(chǎn)品特點
強耐受性
對血紅素、腐殖酸等常見PCR抑制劑表現(xiàn)強耐受性（抗腐殖酸可達70 ng/T，抗血紅素可達12 μM），確保在復(fù)雜樣本中依然可以穩(wěn)定擴增。
強穩(wěn)定性-37℃加速
37℃放置7天能穩(wěn)定檢出低至4 pg的cDNA模板；
37℃放置9天，酶量低至0.625 U時，可穩(wěn)定檢出含有25%豬血背景的4 ng cDNA模板；
37℃放置9天，酶量低至0.164 U時，體系仍能有效擴增，并可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測到預(yù)期條帶。
強穩(wěn)定性-反復(fù)凍融
經(jīng)過25次凍融，試劑仍能穩(wěn)定檢測到低至400 fg的微量cDNA模板；
經(jīng)過25次凍融后，低至0.625 U的酶量可穩(wěn)定檢出含有25%豬血背景的4 ng cDNA模板；
經(jīng)過25次凍融后，酶量低至0.164 U時，體系仍能有效擴增，并可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測到預(yù)期條帶。
強穩(wěn)定性-模擬運輸
試劑模擬運輸96 h后，37℃放置7天能穩(wěn)定檢出到低至4 pg的cDNA模板；
試劑模擬運輸96h后，37℃放置7天，酶量低至0.625U能穩(wěn)定檢出含有25%豬血背景的4ng cDNA模板；
試劑模擬運輸96h后，37℃放置7天，酶量低至0.164 U時，體系仍能有效擴增，并可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測到預(yù)期條帶。
更快的熱啟動
預(yù)變性時間可縮短至95℃ 30s，與2min效果無顯著差異，進一步縮短熱啟動時間。
客戶實測
本次實驗在優(yōu)化條件下，比較了兩種擴增酶對磁珠提取的血液DNA樣本進行30重STR分型的檢測性能。毛細管電泳（CE）結(jié)果顯示，兩者在200–500?bp 范圍內(nèi)均呈現(xiàn)出清晰、分離度良好的峰，無明顯雜峰或引物二聚體，表明擴增效率相當且特異性高。
同樣，在Chelex粗處理DNA的擴增性能表明兩種擴增酶也表現(xiàn)出較高的一致性。
?產(chǎn)品信息
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參考文獻
[1] U.S. Deppartment of Justice (NIJ). Improving Analysis of “ Trace DNA” Evidence.