細胞培養(yǎng)過程中經(jīng)常需要進行細胞消化的操作，因而消化細胞所用到的胰蛋白酶會細胞培養(yǎng)不可或缺的，也是很重要的，會影響到細胞的生長狀態(tài)，下面就細胞胰蛋白酶進行一個詳細的介紹。
胰蛋白酶大致可以分為兩種，一種是重組胰蛋白酶，一種是非重組的胰蛋白酶。
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非重組的胰蛋白酶來源于動物提取，帶有動物源性，也是傳統(tǒng)使用的胰蛋白酶，普遍存在于動物消化系統(tǒng)，直接提取自?；蜇i的胰腺組織。
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重組胰蛋白酶是利用基因重組技術(shù)生產(chǎn)的，沒有動物源性。
產(chǎn)品介紹和應(yīng)用
01
非重組胰蛋白酶（有動物源性）
產(chǎn)品特點
非重組胰蛋白酶（又稱胰酶）是從牛、羊、豬的胰臟中所提取的一種絲氨酸蛋白水解酶，能特異性切割帶正電荷賴氨酸和精氨酸羧基端，通過多重結(jié)晶方式純化，并進一步采取層析及超濾技術(shù)制備而得，帶有動物源性。
由于胰酶可以作用跨膜蛋白和胞外基質(zhì)中的蛋白質(zhì)，如：鈣粘素、整聯(lián)蛋白等，因此胰酶現(xiàn)常用于解離組織和單層細胞。雖然胰蛋白酶能使細胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細胞離散，但不同的組織或者細胞對胰酶的反應(yīng)是不一樣的，分散細胞的活性還與胰酶濃度、反應(yīng)溫度和時間有關(guān)，在pH條件為7-9、溫度為37℃的條件下胰酶分散細胞的作用能力最強。將EDTA添加到胰蛋白酶溶液中作為螯合劑，將鈣和鎂結(jié)合成六齒結(jié)構(gòu)，能削弱細胞間粘附，增強胰蛋白酶對水解靶向肽鍵的獲取。
早期的胰蛋白酶在生物制藥領(lǐng)域的主要應(yīng)用是胰島素的生產(chǎn)，很快也在其他細胞培養(yǎng)領(lǐng)域應(yīng)用起來。動物胰酶普遍用于血清培養(yǎng)，不同的細胞加入胰酶的成分和濃度不一樣。
應(yīng)用領(lǐng)域
1. 胰島素、滅活疫苗生產(chǎn)；
2. 組織細胞分離及培養(yǎng)；
3. 臨床外科使用；
4. 食品行業(yè)加工助劑。
02
重組胰蛋白酶（非動物源性 ）
產(chǎn)品特點
重組胰蛋白酶是一種使用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的酶，具有穩(wěn)定性好、純度高、無動物來源的優(yōu)點?，F(xiàn)代生物制藥的生產(chǎn)過程中，使用含有動物源的原料，可能會將引起人畜共患病的潛在病毒源帶入產(chǎn)品中，如瘋牛病的BSE、口蹄疫病毒等，為了減少污染源，通過基因工程技術(shù)合成胰蛋白酶，解決了傳統(tǒng)使用的豬或牛胰蛋白酶可能帶來病毒污染的風(fēng)險。
重組胰蛋白酶多用重組大腸桿菌或酵母系統(tǒng)重組表達并經(jīng)過多步層析純化獲得，無糜蛋白酶等雜酶污染。重組胰蛋白酶與天然提取的胰蛋白酶相比具有相同的特性，其氨基酸序列與豬源胰蛋白酶序列同源，能特異性切割多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基。因其無動物源污染性和純度高，在醫(yī)藥開發(fā)、生化研究、蛋白組學(xué)等領(lǐng)域中有著廣泛的應(yīng)用。
市場主流的重組胰蛋白酶是利用DNA重組技術(shù)在大腸桿菌或酵母中表達的重組豬胰蛋白酶，其氨基酸序列與豬胰蛋白酶完全一致，具有與天然胰蛋白酶相同的活性和特異性。其由223個氨基酸構(gòu)成，含有6對二硫鍵。該酶包含兩種胰蛋白酶活性形式：α-胰蛋白酶和β-胰蛋白酶。其活性受絲氨酸蛋白酶抑制劑如PMSF和TLCK等、金屬離子螯合劑如EDTA等的抑制。重組胰酶用于無血清培養(yǎng)，同胰蛋白酶一樣，不同的細胞加入胰酶的成分和濃度不一樣。
應(yīng)用領(lǐng)域
1. 疫苗和重組胰島素生產(chǎn)；
2. 細胞分析的組織樣本制備；
3. 免疫細胞治療；
4. 生物藥物生產(chǎn)；
5. 蛋白質(zhì)序列、結(jié)構(gòu)及組學(xué)研究。
產(chǎn)品詳細對比
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產(chǎn)品 |
非重組胰蛋白酶（有動物源性） |
重組胰蛋白酶（無動物源性） |
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產(chǎn)品貨號 |
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來源 |
取自牛、豬、羊的胰臟 |
大腸桿菌（40512ES） 畢赤酵母（20416ES） |
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安全性 |
潛在病原污染 |
無外源性病毒污染 |
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純度 |
1：250胰蛋白酶溶液中90%以上為雜質(zhì) |
高純度（β-trypsin≥70%， α-trypsin≤20%） |
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消化細胞類型 |
大部分連續(xù)的強貼壁細胞系 |
大部分連續(xù)的強貼壁細胞系 |
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糜蛋白酶限量 |
每2500單位胰蛋白酶中不得多于50單位的糜蛋白酶。 |
無糜蛋白酶等雜酶污染 |
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比活 |
≥2500 USP units/mg 蛋白 |
≥3800 USP units/mg 蛋白 |
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消化效果 |
不穩(wěn)定 |
消化能力強，酶用量少 |
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自切率 |
容易自切產(chǎn)生自身自切片段影響質(zhì)譜分析結(jié)果 |
容易自切產(chǎn)生自身自切片段影響質(zhì)譜分析結(jié)果 |
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溶解液 |
含或不含Ca2+、Mg2+的HBSS溶液 |
含或不含Ca2+、Mg2+的HBSS溶液（40512ES）； 1 mM HCL（20416ES） |
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細胞存活 |
正常 |
正常 |
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是否需要凍融 |
是 |
是 |
細胞消化中除了用到最常見的胰蛋白酶外，還有其他很多種類的消化酶產(chǎn)品也可能被用到，這里做一個總結(jié)，供大家參考：
關(guān)于膠原酶的應(yīng)用領(lǐng)域
膠原酶（Collagenase）是一種肽鏈內(nèi)切酶，能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列并切割該序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之間的肽鍵，膠原酶是唯一一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶，能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白、多糖和脂質(zhì)，使得本品非常適用于組織消化。
1. 膠原酶Ⅰ，通常用作上皮細胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細胞的制備；
2. 膠原酶II，用于心臟、骨、肌肉、肝、甲狀腺和軟骨等組織來源細胞的制備；
3. 膠原酶III，常用于乳腺細胞的制備；
4. 膠原酶IV，通常用于胰島細胞的制備，或者需要維持受體完整性的細胞制備實驗。
5. 膠原酶Ⅴ，適用于胰腺小島細胞和結(jié)締組織細胞的分離。
關(guān)于復(fù)合胰蛋白酶應(yīng)用領(lǐng)域
Accutase是包含蛋白水解酶和膠原酶活性的一種細胞消化液，是胰酶-EDTA消化液的完美替換產(chǎn)品，用于從常規(guī)組織培養(yǎng)器皿和粘附培養(yǎng)器皿中消化細胞。Accutase適用于組織解離和細胞分離，因分離后的細胞能保持完好的表面抗原，且不含任何動物動物或者細菌來源組分，可滿足對后續(xù)如細胞表面標(biāo)記、病毒生長分析、流式細胞分析以及生物反應(yīng)器相關(guān)檢測等多種實驗的要求。
關(guān)于胰酶替代物的應(yīng)用領(lǐng)域
PerfCell Tryzyme™ Express 酶產(chǎn)品純度高，細胞傷害小，消化作用溫和，且能穩(wěn)定保存在室溫條件，逐漸成為不同細胞系培養(yǎng)的理想消化酶。這類的產(chǎn)品使用過程無需使用胰蛋白酶抑制劑來滅活，同時也不含有動物源，對于一些無血清生長的貼壁細胞實驗更為友好。
關(guān)于分散酶應(yīng)用領(lǐng)域
Dispase II分散酶II，是一種非特異性金屬蛋白酶，在細胞生物學(xué)中常用于從不同的組織或器官分離出單細胞，并用于后續(xù)細胞培養(yǎng)，如原代細胞的分離，細胞傳代等，還可用于消除懸浮細胞培養(yǎng)過程中發(fā)生的細胞聚集。與其他細胞生物學(xué)常用蛋白酶（如胰蛋白酶、膠原酶、鏈霉蛋白酶等）相比，該酶具有以下優(yōu)勢：
1. 快速有效且溫和的細胞消化酶，對細胞損傷小，且能維持細胞膜完整性；
2. 來源于細菌，無支原體或其他動物病毒污染；
3. 穩(wěn)定性強，不受溫度、pH及血清組分的影響；
4. 可用于多種類型組織和細胞的分離等。
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貨號 |
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