作為新興技術(shù)，mRNA疫苗通過(guò)脂質(zhì)納米顆粒（LNP）將mRNA導(dǎo)入體內(nèi)表達(dá)抗原蛋白，從而刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)。新冠肺炎疫情（COVID-19）爆發(fā)后，針對(duì)性的mRNA疫苗在多種疫苗類型中脫穎而出。與此同時(shí)，諸如自復(fù)制mRNA和circRNA等新型路線也逐漸走入大眾視野，隨著資本的大量涌入，circRNA技術(shù)迅速發(fā)展起來(lái)。
circRNA分子呈共價(jià)閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)，不含5’-Cap和3’-polyA結(jié)構(gòu)，不易被RNase降解，具有較高的穩(wěn)定性，因而大大延長(zhǎng)了其半衰期，從而達(dá)到低劑量長(zhǎng)時(shí)效的目的。此外circRNA因?yàn)椴恍枰揎椇塑蘸图用奔游驳炔僮鳎赃€有相對(duì)簡(jiǎn)單的生產(chǎn)工藝優(yōu)勢(shì)。與mRNA相同，前期線性RNA的獲得均來(lái)組線性化質(zhì)粒的體外轉(zhuǎn)錄，而后根據(jù)其環(huán)化工藝的不同，circRNA的人工制備大致分為三個(gè)類型：I型內(nèi)含子自剪切、Ⅱ型內(nèi)含子自剪切和T4 RNA連接酶。大致流程如下：
在環(huán)化結(jié)束后，需要通過(guò)系列純化手段對(duì)circRNA進(jìn)行高純度回收，由于不同環(huán)化方式的效率差異，RNase R的引入，有效去除未環(huán)化的線性RNA，從而達(dá)到純化circRNA的目的。RNase R來(lái)源于大腸桿菌RNR超家族，是一種鎂離子依賴性的3'—5'核糖核酸外切酶，可從3'—5'方向?qū)NA逐步切割成二核苷酸和三核苷酸。RNase R幾乎能夠消化所有線性的RNA，但不易消化環(huán)狀RNA、套索結(jié)構(gòu)RNA和3'端突出少于7個(gè)核苷酸的短雙鏈RNA分子。通常用來(lái)消化線性RNA以富集circRNA或套索結(jié)構(gòu)RNA。近岸蛋白經(jīng)過(guò)系列驗(yàn)證，重磅推出高活性GMP級(jí)RNase R（目錄號(hào)：GMP-E224）。GMP級(jí)產(chǎn)品采用藥用規(guī)格原輔料生產(chǎn)，嚴(yán)格控制宿主核酸殘留污染，符合GMP規(guī)范的產(chǎn)品生產(chǎn)與質(zhì)量管理規(guī)程，保障生產(chǎn)過(guò)程及所有原輔料可追溯。
質(zhì)量控制
應(yīng)用實(shí)例
RNase R針對(duì)Total RNA、ssRNA及circRNA的消化實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)證明， RNase R可以消化絕大部分的總 RNA樣品，完全消化ssRNA樣品，對(duì)circRNA樣品起到良好的純化效果。
為了進(jìn)一步驗(yàn)證RNase R對(duì)環(huán)狀RNA無(wú)酶切作用，利用qPCR方式檢測(cè)經(jīng)RNase R（藍(lán)色：近岸蛋白；綠色：對(duì)照品牌）消化后的總RNA樣品中hsa_circKIF12a和hsa_circVapa基因的豐度變化，結(jié)果顯示，與陰性組（橙色）相同，兩個(gè)基因的豐度基本沒有變化，而經(jīng)RNase A（粉色）消化的樣品中基因豐度明顯下降，表明環(huán)狀RNA耐受RNase R的消化。
隨著序列設(shè)計(jì)的不斷優(yōu)化，環(huán)化工藝的進(jìn)一步探索，伴隨circRNA的各項(xiàng)技術(shù)壁壘也將會(huì)逐步打破。國(guó)外以O(shè)RNA Therapeutics和Laronde為代表，國(guó)內(nèi)環(huán)碼生物、科銳邁德、圓因生物等公司先后成立布局circRNA，越來(lái)越多的研發(fā)管線來(lái)滿足臨床治療需求，circRNA未來(lái)可期。
相關(guān)產(chǎn)品：