實驗狗總是有做不完的實驗,這不,才做了周細胞,黑素細胞又爬山涉水的趕著趟過來了,拿起手術剪,鑷子等實驗小幫手開始操作吧!
組織樣本清理過程
a)取帶有毛孔的皮膚,1cm×1cm大小,一定要帶毛囊,酒精浸泡1分鐘后,用預冷的49%PBS+49%MEM+2%PSN沖洗兩次,再去除皮下結締組織;
b)用眼科剪將皮膚剪成0.2cm×0.5cm大小的皮膚塊,放入20mL的Dispase II酶消化液中,一定要浸沒,4℃過夜消化14-16h;
c)第二天觀察組織切口表皮和真皮有分開跡象時將皮膚放入干燥的培養皿中用眼科鑷揭下表皮,若表皮不易揭下,再次將皮膚放入DispaseII酶中,37℃孵育15-30min;
d)將揭下的表皮收集到35mm干燥的培養皿中,加入1ml的0.25%胰酶37℃消化8min;
e)加入2mL血清終止消化,吹打數次,200目細胞過濾網過濾,過濾后轉入15ml離心管中,1000rpm離心5min;
f)加入2mL 黑色素完全培養基重懸,置入35mm培養皿中;
g)培養1h-2h后,顯微鏡觀察黑素細胞貼壁,換液去掉懸浮的細胞,懸浮細胞為角質細胞,之后每隔2天換一次培養基


DAY5:黑素細胞及HMSA免疫熒光染色
是不是很簡單,不只是提取了黑素還拿捏了角化細胞?
還有一個秘密想要告訴您

使用以下神器,輕松得到你想要的細胞

MM黑素細胞培養基:
1. 低血清組分,血清含量為1%
2. 添加角化細胞堵斷小分子化合物及促黑素細胞生長的蛋白讓黑素細胞自由生長
3. 培養基不含TPA致癌小分子,避免黑色細胞在擴增過程中的癌化

KGM角化細胞培養基
1. 套裝組成,使用方便;
2. 采用ITS+E替代BPE無血清的組分,減少動物源蛋白干擾;
3. 經多種角化細胞株及原代細胞測試,組分穩定,細胞生長狀態良好
