操作步驟：
1. 將懸浮細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，用PBS洗滌細(xì)胞，離心300g，5分鐘。去除上清液，重新懸浮細(xì)胞至適當(dāng)濃度（如1×10^5）
2. 接種細(xì)胞：用含10%細(xì)胞完全培養(yǎng)配成單個(gè)細(xì)胞懸液，以每孔1000-10000個(gè)細(xì)胞接種到96孔板，每孔體積200ul。
3. 培養(yǎng)細(xì)胞：在37℃、5%CO2的條件下孵育16-48小時(shí)，然后在倒置顯微鏡下觀察。
4. 呈色：取出96孔板，將每孔上清液抽出。每孔加入100ul的預(yù)先稀釋好的MTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），使細(xì)胞與mtt試劑充分接觸后，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí),使細(xì)胞代謝mtt，形成紫色結(jié)晶物;
5. 溶解結(jié)晶物：對(duì)于懸浮細(xì)胞，推薦跳過某些步驟并直接進(jìn)行離心（1000轉(zhuǎn)x10分鐘），然后小心吸掉上清液。接著，每孔加入100ul的二甲基亞砜（DMSO），置搖床上低速振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分溶解。
6. 比色：在酶聯(lián)免疫檢查儀上，選擇OD570nm（630nm校準(zhǔn)）測(cè)量各孔的吸光值。
Thp-1 cells Line（啟達(dá)生物，catlog：CD0122)
K-562 cells Line（啟達(dá)生物 catlog：CD0115)
注意事項(xiàng)：
6. 實(shí)驗(yàn)環(huán)境：確保實(shí)驗(yàn)在無菌、無塵、恒溫（37℃）和恒濕的環(huán)境中進(jìn)行，以維持細(xì)胞的最佳生長(zhǎng)條件。
7. 溶解結(jié)晶物時(shí)應(yīng)充分振蕩，以確保完全溶解。
8. 細(xì)胞計(jì)數(shù)：在接種細(xì)胞時(shí)，確保準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，因?yàn)榧?xì)胞數(shù)量直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
9. MTT溶液：MTT溶液需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存導(dǎo)致活性降低。
10. 避免交叉污染：在操作過程中，注意更換吸頭和管尖，避免不同孔之間的交叉污染。
11. 離心條件：在離心過程中，確保轉(zhuǎn)速和時(shí)間設(shè)置正確，避免對(duì)細(xì)胞造成損傷。
12. DMSO操作：DMSO具有一定的毒性，操作時(shí)需佩戴防護(hù)眼鏡和手套，確保安全。
8. 結(jié)果解讀：OD值的變化反映了細(xì)胞的活性，但需注意排除其他可能干擾因素，如培養(yǎng)基的顏色、氣泡等。
9. 實(shí)驗(yàn)記錄：詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)過程中的所有操作和環(huán)境條件，以便后續(xù)分析和復(fù)查。
以上步驟和注意事項(xiàng)完成后，可以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性，從而得到準(zhǔn)確的細(xì)胞活性數(shù)據(jù)。