要做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)了，你是否會(huì)焦慮的不知從何下手啊！
實(shí)驗(yàn)室沒有做AAV的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，沒人指導(dǎo)，我需要首先了解和確定哪些基礎(chǔ)信息呢？
別急，小編這就帶你理理思路：
對(duì)AAV你了解多少？它有哪些優(yōu)勢(shì)和不足？
明確自己的目的細(xì)胞類型或者靶向器官是什么？
針對(duì)目的部位，哪種注射方式效果更佳？
目的細(xì)胞類型或器官是否有特異性啟動(dòng)子呢？啟動(dòng)子該怎么選？
那么多血清型，用哪個(gè)合適呢？
AAV的滴度多少合適呢？應(yīng)該注射多少的量呢？
什么時(shí)候取樣觀察呀？
AAV有哪些優(yōu)勢(shì)和不足？
目前尚未發(fā)現(xiàn)野生型AAV對(duì)人體致病（80%的人感染過AAV），重組AAV去除了野生型AAV基因組的96%，進(jìn)一步保證了安全性，是目前最理想的基因治療載體。
AAV作為基因載體有多方面的優(yōu)勢(shì)：
A.NIH對(duì)于生物技術(shù)制品的相關(guān)評(píng)級(jí)，腺相關(guān)病毒載體（AAV）屬于RG1，最安全等級(jí)：腺相關(guān)病毒（AAV）不插入基因組，不改變基因組結(jié)構(gòu)，因而沒有潛在的致瘤性。
B.AAV具有廣泛的宿主范圍，對(duì)分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力。有比較強(qiáng)的靶向性，可以選擇特定的器官進(jìn)行轉(zhuǎn)染。物理性質(zhì)穩(wěn)定。在60℃不能被滅活，能抗氯仿。
C.AAV的免疫原性低，基本不引起機(jī)體免疫排斥和炎癥反應(yīng)，能保持持久的體內(nèi)留存能力和表達(dá)能力。
D.AAV可以保持基因長(zhǎng)期轉(zhuǎn)錄表達(dá)，在體內(nèi)表達(dá)一般在3-4周可以達(dá)到高峰，隨后持續(xù)表達(dá)，作用時(shí)間＞5個(gè)月；甚至有臨床實(shí)驗(yàn)2年后仍可以檢測(cè)到其表達(dá)。
E:在體內(nèi)感染特異性效果好，包括感染能力和感染的特異性。
局限性：
A.不適合大片段基因的導(dǎo)入：AAV載體一般只能帶不超過4.7kb外源基因，這還包括了啟動(dòng)子的長(zhǎng)度。
B.體外實(shí)驗(yàn)表達(dá)水平較低：AAV病毒的基因組是單鏈 DNA，在體外環(huán)境形成雙鏈并轉(zhuǎn)錄翻譯外源基因的效率非常低。
C.需較長(zhǎng)時(shí)間開始表達(dá)：AAV在感染后需要較長(zhǎng)的時(shí)間來表達(dá)外源基因，所以感染AAV后建議至少 1 周后做檢測(cè)。
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怎么確定合適的注射方式
病毒的注射方式大大影響其感染效率，常見的注射方式有：尾靜脈注射、腹腔注射、灌腸、腦立體定位注射、原位注射等等。可以通過選擇合適的注射方式來實(shí)現(xiàn)組織特異性基因調(diào)控，對(duì)于特定部位，通常采用局部原位注射的方式，比如腦立體定位注射、肌肉定點(diǎn)注射、肝實(shí)質(zhì)注射、心肌原位注射、眼原為注射、關(guān)節(jié)內(nèi)注射等。
常見部位注射方式可以參考下表：
2如何選擇啟動(dòng)子
組織特異性啟動(dòng)子通常由特定細(xì)胞專一表達(dá)基因的啟動(dòng)子鑒定得來的，因此組織特異性啟動(dòng)子種類較多，且細(xì)胞特異性更好。根據(jù)自己的細(xì)胞類型或組織，可以選擇特異性啟動(dòng)子，沒有特異性啟動(dòng)子的可以用常規(guī)啟動(dòng)子。
目前已報(bào)道的組織特異性啟動(dòng)子種類繁多，吉?jiǎng)P基因已累積開發(fā)出數(shù)十種針對(duì)不同組織、細(xì)胞的特異性啟動(dòng)子。根據(jù)針對(duì)的細(xì)胞類型，靶向器官類型，選擇適合的啟動(dòng)子，具體選擇可參考下表：
3那么多血清型該選擇哪個(gè)呢？
AAV可分為12種血清型(AAV-1~AAV-12)和100多種變異體。血清型的一些位點(diǎn)突變后特異性提高；不同血清型的AAV之間也可以雜交，雜交后的AAV會(huì)兼有雜合雙方的特點(diǎn)，因此，更多的AAV亞型順勢(shì)誕生。
可通過查閱文獻(xiàn)，參考前人研究中哪種血清型更合適；如果還不確定選擇哪種血清型，可嘗試使用AAV試用裝進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，通過比較不同血清型對(duì)目標(biāo)組織的感染效果，摸索最佳實(shí)驗(yàn)條件（注射方法、注射位點(diǎn)、病毒用量等），以便獲得更理想的結(jié)果。
吉?jiǎng)P基因持續(xù)開發(fā)適用于不同組織或細(xì)胞的特異性血清型，目前已開發(fā)出多種特異性血清型，目前客戶使用效果反饋均比較好，具體見下表：
4 病毒注射劑量及檢測(cè)時(shí)間
表達(dá)效果與注射劑量有一定的相關(guān)性，但注射劑量過大時(shí)會(huì)對(duì)肝臟造成損害。小鼠尾靜脈注射用量大，注射體積一般在100-200ul，小范圍局部注射或原位注射用量少。
AAV在感染后需要較長(zhǎng)的時(shí)間來表達(dá)外源基因，一般7-14天開始表達(dá)，細(xì)胞分裂不旺盛的部位會(huì)需要更長(zhǎng)時(shí)間表達(dá)。因此感染AAV后建議至少 1 周后再做檢測(cè)。在體內(nèi)表達(dá)一般在3-4周可以達(dá)到高峰，這個(gè)時(shí)間檢測(cè)效果會(huì)較好。
5 怎么稀釋病毒？
稀釋病毒產(chǎn)品的等滲溶液沒有其他特殊要求，常規(guī)動(dòng)物試驗(yàn)用的等滲溶液即可，如 PBS、生理鹽水等。
用完后怎么處理？
對(duì) AAV 最有效的消毒劑是新鮮配制的 1% 次**鈉溶液，將 84 消毒液原液加水稀釋，浸泡 15 min 可以達(dá)到消毒目的。
其他的處理方式包括用 2% 戊二醛溶液或是 0.25% SDS 溶液。
也可以 121℃ 高溫消毒 1 小時(shí)。
腺相關(guān)病毒是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)常用的病毒載體，使用特異性啟動(dòng)子靶向轉(zhuǎn)錄能力結(jié)合AAV血清型靶向感染能力，可實(shí)現(xiàn)更精準(zhǔn)、高效的基因操作。目前已被廣泛應(yīng)用于神經(jīng)、肌肉、骨骼、心血管、眼科、肝臟、腎臟、脂肪、胰腺等多個(gè)研究領(lǐng)域。