介紹
PI（Propidium iodide），即碘化丙啶，是一種常用的熒光染料，在細胞生物學(xué)研究中發(fā)揮著重要作用。它不能透過完整的細胞膜，但在細胞凋亡晚期或細胞膜受損時，能夠進入細胞并與核酸結(jié)合，發(fā)出紅色熒光。PI常用于細胞活力檢測、細胞周期分析以及細胞凋亡研究等領(lǐng)域。
技術(shù)原理原理
PI不能穿透細胞膜而被排斥在活細胞外，但是可以穿過破損的細胞膜而對核染色。利用這一特性，通常與Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活細胞熒光探針一起使用，同時對活細胞和死細胞染色和鑒定，用于細胞凋亡相關(guān)的研究。也可以用作多重熒光染色的復(fù)染劑，兼容于各種細胞標記技術(shù)，包括直接或者間接的熒光抗體檢測，mRNA原位雜交，細胞結(jié)構(gòu)特異性的熒光探針檢測法以及組織染色。PI的單獨染色也可以進行細胞周期的檢測。
使用方法
1、收集細胞，密度約 2×105~1×106。離心后吸除上清，輕彈管壁就剩下的液體重懸細胞。加入1 mL常溫存放的PBS；
2、將所有的重懸細胞轉(zhuǎn)移到4 mL于-20ºC預(yù)冷的無水乙醇，在高速渦旋混勻的同時一邊用槍緩慢的添加細胞懸液到乙醇內(nèi)。于-20ºC乙醇中固定5 - 15 min。
3、離心收集細胞，除去乙醇。輕彈管壁以彈松細胞后，加入5 mL室溫的PBS。允許細胞水化15 min；
4、用染色液（100 mM Tris, pH 7.4、150 mM NaCl、1 mM CaCl2、0.5 mM MgCl2 , 0.1% Nonidet® P-40）稀釋1 mg/mL（1.5 mM）PI儲存液1:500，得到3 µM的PI工作液。1 mL 的PI染色液足夠用于每個細胞樣本的檢測。
5、 樣本制備步后離心收集細胞，去除上清，用手輕彈管壁以彈松細胞后，加入1 mL的PI染色工作液。室溫孵育15 min后，流式細胞儀進行細胞分析。
運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。4 ºC避光保存，至少一年穩(wěn)定。
常見問題
1）碘化丙啶（PI）是已知的誘變劑，因此PI溶液在丟棄之前需要先經(jīng)過活性炭處理。
2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品貨號 |
規(guī)格 |
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40710ES03 |
1ml |
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40711ES10/60 |
10mg/100mg |
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40727ES10 |
10mg |
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40728ES03 |
1mg (200μl) |
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40722ES03 |
1 mg |
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40724ES10 |
10 g |