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在生命科學(xué)研究和生物制藥領(lǐng)域，細(xì)胞培養(yǎng)是實驗成功的基石。然而，一種肉眼不可見的“隱形殺手”——支原體（Mycoplasma），卻可能悄無聲息地污染細(xì)胞，導(dǎo)致實驗結(jié)果失真甚至失敗。支原體是目前已知最小、最簡易的原核生物，無細(xì)胞壁的特性使其難以被常規(guī)抗生素殺滅。它們通過黏附宿主細(xì)胞表面，竊取營養(yǎng)并釋放毒素，雖不直接致死細(xì)胞，卻會嚴(yán)重干擾代謝過程，保守估計全球15%-35%的細(xì)胞培養(yǎng)存在支原體污染風(fēng)險。如何高效預(yù)防與清除支原體，成為實驗室亟需解決的難題。

 支原體背景信息  

定 義

支原體（Mycoplasma）又稱霉形體，是目前發(fā)現(xiàn)的最小、最簡單的無細(xì)胞壁的原核生物，直徑大小0.1~0.3μm，該大小剛好介于細(xì)菌和病毒之間。其能通過濾膜且呈高度多形性，是哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)中相對常見且難以檢測的污染物。由于能形成絲狀與分枝形狀，故稱為支原體。

分 類

支原體（mycoplasma）是細(xì)菌中最小的一種微生物，在生物學(xué)分類中屬于柔膜菌門、柔膜菌綱，又分屬于不同目科屬。其中研究較多的支原體目、支原體科，主要包含支原體屬、脲原體屬兩個種屬。

圖1.支原體結(jié)構(gòu)圖

常見形態(tài)

支原體有多種形態(tài)，有球形、桿形、絲狀、分支狀等，通?？梢栽趻呙桦婄R和透射電鏡下進(jìn)行觀察。細(xì)胞培養(yǎng)上清和細(xì)胞膜是比較適宜支原體生長的；寄生在細(xì)胞表面的支原體可以穿透宿主細(xì)胞膜。

圖2.支原體形態(tài)圖

 支原體污染的來源和常見種類  

污染的來源

主要為細(xì)胞培養(yǎng)液或其成分（如培養(yǎng)基原料、血清和其他試劑）、實驗室操作人員、細(xì)胞培養(yǎng)箱、液氮培養(yǎng)箱、空氣中的粒子和氣溶膠、抗生素的過度使用、密封不當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)物和污染了支原體的細(xì)胞等。

圖3.易受支原體污染的來源

常見的污染支原體種類

細(xì)胞培養(yǎng)中95%的支原體污染主要是由萊氏無膽甾原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、口腔支原體、發(fā)酵支原體、人型支原體這6種常見支原體引起的。

表1.污染支原體種類

 支原體污染方式和影響  

污染的方式

支原體一般通過黏附在宿主上皮細(xì)胞表面，從而成為人類、動物和植物的寄生物，通過攝取宿主細(xì)胞的膽固醇等營養(yǎng)物質(zhì)和/或代謝產(chǎn)生的毒素、過氧化氫等有毒物質(zhì)危害人類和動植物，給細(xì)胞制劑和科研工作帶來負(fù)面影響。

污染的影響

保守估計常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染率為15~35%，支原體污染會對細(xì)胞內(nèi)代謝或生化合成過程造成影響，雖不會明顯表現(xiàn)為造成細(xì)胞死亡，但卻會嚴(yán)重干擾實驗結(jié)果的可信度。

圖4 支原體污染的危害

 支原體污染，從預(yù)防到清除的關(guān)鍵策略 01  

預(yù)防先行

切斷污染源頭

§ 

嚴(yán)格檢測新引入細(xì)胞：所有新細(xì)胞株或原代分離細(xì)胞需通過支原體檢測（如qPCR或LAMP法），確保陰性后方可進(jìn)入培養(yǎng)體系。

§ 

規(guī)范實驗操作：穿戴專用防護(hù)裝備，定期消毒超凈臺、移液器等設(shè)備，避免交叉污染。

§ 

環(huán)境管控：細(xì)胞房每周紫外線消毒，每月全面清潔并配合支原體預(yù)防試劑擦拭死角，維持無菌環(huán)境。

02  

精準(zhǔn)清除

高效去除污染

支原體去除試劑-MycAwayTM 支原體去除試劑（1000×）40607ES通過靶向支原體DNA快速起效，3天即可顯著改善污染。其低毒性設(shè)計不損傷宿主細(xì)胞，且操作簡便，僅需加入培養(yǎng)基孵育，廣譜覆蓋95%以上常見支原體類型（如豬鼻支原體、口腔支原體等）。產(chǎn)品特點如下：

§ 

去除效果顯著

§ 

支原體污染的細(xì)胞中，加入翌圣MycAway™ 支原體去除試劑（1000×），連續(xù)培養(yǎng)1周后，培養(yǎng)基顏色明顯緩解（支原體污染的細(xì)胞，培養(yǎng)基約1天就會變黃，）顯微鏡觀察細(xì)胞狀態(tài)，結(jié)果顯示細(xì)胞狀態(tài)明顯改善，細(xì)胞倍增時間恢復(fù)。

圖5.支原體去除前后細(xì)胞狀態(tài)比較

§ 

毒性低

§ 

針對無支原體污染的細(xì)胞，同時使用MycAway™ Treatment(1000×)支原體去除試劑及PBS處理細(xì)胞，24h后，分別使用CCK-8和細(xì)胞計數(shù)的方式對細(xì)胞活力和增殖進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，MycAway™ Treatment(1000×)支原體去除試劑對細(xì)胞生長無顯著抑制作用，毒性低。

圖6.MycAway™ Treatment(1000×)支原體去除試劑細(xì)胞毒性測試結(jié)果

03  

翌圣生物

支原體防控的全周期保障

為了構(gòu)建支原體污染的全周期防控體系，翌圣生物科技以創(chuàng)新技術(shù)為核心，開發(fā)了覆蓋“檢測-清除-預(yù)防”三大維度的完整產(chǎn)品矩陣，為實驗室提供一站式解決方案：

§ 

精準(zhǔn)檢測：支原體qPCR檢測試劑盒、LAMP等溫擴(kuò)增試劑盒等，支持快速篩查與藥典級檢測，靈敏度達(dá)10 CFU/mL，滿足細(xì)胞治療產(chǎn)品快速放行需求。

§ 

靶向清除：MycAway™支原體去除試劑（細(xì)胞用）及環(huán)境專用消殺試劑，廣譜覆蓋95%以上污染支原體，3天高效起效，兼顧細(xì)胞安全性與操作便捷性。

§ 

長效防護(hù)：支原體預(yù)防試劑結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，從新細(xì)胞準(zhǔn)入、實驗環(huán)境管控到設(shè)備定期消殺，多節(jié)點阻斷污染傳播鏈。

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 產(chǎn)品清單