在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,支原體和黑膠蟲污染是兩個(gè)常見的問題,它們會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝和實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生嚴(yán)重影響。今天,我們就來揭開它們的神秘面紗,并探討如何應(yīng)對(duì)這些麻煩制造者。
支原體是一種極其微小的原核生物,體積微小,能輕易穿透常規(guī)濾膜和抗生素屏障,成為細(xì)胞培養(yǎng)中最棘手的污染源之一。支原體污染的特征包括細(xì)胞增殖速度減緩、細(xì)胞形態(tài)異常(如拉絲、鋪展等),且培養(yǎng)基通常不會(huì)渾濁。支原體感染后,細(xì)胞可能會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)遲緩、代謝速率改變,甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡,嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
支原體放大后:
支原體污染的特征:
1. 細(xì)胞增殖速度減緩、上清液依然清澈、大多數(shù)背景干凈,但細(xì)胞形態(tài)可能出現(xiàn)異常,如拉絲、鋪展等現(xiàn)象。
2. 晚期支原體污染會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)基變酸性,但通常沒有明顯的跡象表明培養(yǎng)物受到污染。
3. 哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物的特征:在污染的早期階段,支原體通常不會(huì)引起培養(yǎng)基的pH值變化,也不會(huì)對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)生顯著的毒性影響。支原體的生長(zhǎng)主要與哺乳動(dòng)物的細(xì)胞膜有關(guān)。在許多情況下,沒有支原體污染的跡象,然而,支原體可引起細(xì)胞生長(zhǎng)特性的變化、細(xì)胞代謝的抑制、核酸合成的破壞、染色體畸變、細(xì)胞膜抗原性的變化,并可改變轉(zhuǎn)染率和病毒可接受性。
4. 這些“微小盜賊”通過吸取細(xì)胞營(yíng)養(yǎng),導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)受阻,形態(tài)異常、甚至死亡,嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
預(yù)防措施:定期對(duì)培養(yǎng)箱、工作臺(tái)等設(shè)備進(jìn)行消毒。選擇經(jīng)過嚴(yán)格檢測(cè)的培養(yǎng)基和血清。減少血清的凍融次數(shù),及時(shí)更換培養(yǎng)液并保持培養(yǎng)環(huán)境的清潔,嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程,避免交叉污染。
抗生素:細(xì)胞培養(yǎng)中使用的大多數(shù)常規(guī)抗生素對(duì)支原體無效。硫酸慶大霉素、硫酸卡那霉素和酒石酸泰樂菌素在一定程度上是有效的,但可能只是抑制性的,而不是殺支原體的。
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