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反轉(zhuǎn)錄是將RNA轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)DNA (cDNA) 的過程，該反應(yīng)由反轉(zhuǎn)錄酶介導(dǎo)完成。在有退火引物的情況下，反轉(zhuǎn)錄酶首先與 RNA 模板結(jié)合。反轉(zhuǎn)酶的RNA依賴性 DNA 聚合酶活性通過摻入反應(yīng)混合物中的dNTP來合成cDNA，反應(yīng)生成得到 cDNA:RNA 雜合鏈，此過程被稱為第一鏈 cDNA 合成。
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莫洛尼鼠白血病病毒 (M-MLV) 反轉(zhuǎn)錄酶是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)流程中常見的反轉(zhuǎn)錄酶之一。為了獲得更高的反轉(zhuǎn)錄效率、更好的熱穩(wěn)定性和更高的 cDNA 合成率，通常會(huì)對原始的反轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行基因工程改造。目前市面上的反轉(zhuǎn)錄試劑所需要的反轉(zhuǎn)錄時(shí)間普遍從15分鐘到30分鐘不等，時(shí)間相對較長，當(dāng)反應(yīng)樣本量較大時(shí)，整體花費(fèi)時(shí)間量也會(huì)急劇上升。翌圣生物現(xiàn)有的5分鐘反轉(zhuǎn)錄系列產(chǎn)品，在5分鐘內(nèi)即可完成反轉(zhuǎn)錄，省時(shí)高效。
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精品推薦一???
5分鐘一步消化&反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液(Cat #11151ES)
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產(chǎn)品特點(diǎn)
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一步完成：一步完成gDNA去除和反轉(zhuǎn)錄；
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快速反應(yīng)：消化&反轉(zhuǎn)僅需5分鐘；
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高效合成：可保證100 pg RNA反轉(zhuǎn)錄；
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產(chǎn)物穩(wěn)定：cDNA產(chǎn)物可長久穩(wěn)定保存；
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性能展示
??反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)量高??
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圖. 以人293T細(xì)胞RNA為模板，分別檢測三種基因。品牌A、品牌B、品牌C均為一步gDNA去除&反轉(zhuǎn)錄試劑。測試結(jié)果顯示，在1 μg和10 ng Total RNA 投入下，11151ES反轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)量均優(yōu)于其他品牌，Ct值更小。
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圖. 以擬南芥RNA為模板，品牌A、品牌B、品牌C均為一步gDNA去除&反轉(zhuǎn)錄試劑。測試結(jié)果顯示，在1 μg和10 ng Total RNA 投入下，11151ES反轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)量均優(yōu)于其他品牌，Ct值更小。
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?優(yōu)異的靈敏度????
圖. 以人293T細(xì)胞RNA為模板，擴(kuò)增30%GC、50%GC、60%GC和70%GC的基因。分別投入100 pg、1 ng、10 ng、100 ng、1 μg的Total RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄并進(jìn)行熒光定量檢測。結(jié)果顯示，11151ES可滿足100 pg-1 μg RNA的反轉(zhuǎn)錄。
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?cDNA產(chǎn)物穩(wěn)定性好??
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圖.以人293T細(xì)胞RNA為模板進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，將獲得的cDNA產(chǎn)物進(jìn)行反復(fù)凍融，分別凍融10次、20次、30次。測試結(jié)果顯示11151ES反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA產(chǎn)物在30次反復(fù)凍融處理后，仍保持高度的穩(wěn)定性，Ct值差異不大。
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圖. 以人293T細(xì)胞RNA為模板進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，將獲得的cDNA產(chǎn)物在-20℃、4℃、25℃和37℃的溫度條件下放置7天。測試結(jié)果顯示11151ES反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA產(chǎn)物在不同溫度下存儲(chǔ)7天，仍保持高度的穩(wěn)定性，Ct值差異不大。
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客戶用戶體驗(yàn)
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樣本來源：人肝臟組織總RNA
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樣本來源：胃黏膜細(xì)胞RNA
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樣本來源：小鼠胰島素瘤細(xì)胞RNA
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精品推薦二???
5分鐘快速反轉(zhuǎn)錄試劑盒(11149/11150ES)
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產(chǎn)品特點(diǎn)
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快速反轉(zhuǎn)：最快5分鐘左右即可完成第一鏈cDNA合成；
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檢出率高：10 pg-1 ug的RNA檢出率；
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高效合成：合成效率媲美進(jìn)口，最長可合成14kb大小的片段；
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適用廣泛：可用于下游PCR或qPCR；
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示蹤便利：示蹤版包含無干擾、可視化藍(lán)色示蹤染料，提醒加樣進(jìn)度。
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性能展示
??快速反轉(zhuǎn)錄??
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反轉(zhuǎn)錄時(shí)間 |
平均Ct值 |
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5?min |
21.693 |
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10 min |
21.589 |
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15 min |
21.604 |
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20 min |
21.746 |
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25 min |
21.756 |
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30 min |
21.691 |
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圖. 以293T細(xì)胞總RNA為模板，使用11149ES進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到的cDNA 進(jìn)行qPCR 定量分析。結(jié)果顯示，不同反轉(zhuǎn)錄時(shí)間處理的Ct值差值在0.2之內(nèi)。說明產(chǎn)品可在5分鐘內(nèi)完成反轉(zhuǎn)錄，反轉(zhuǎn)效果和長時(shí)間反轉(zhuǎn)效果持平。
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靈敏度高，最低可至10 pg
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圖. 以293T細(xì)胞總RNA為模板，使用11149ES進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到的cDNA 進(jìn)行qPCR 定量分析。結(jié)果顯示，RNA 投入量為10 pg-1 μg時(shí)，11149ES均可反轉(zhuǎn)成功，保證定量結(jié)果。
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?擴(kuò)增性能好，最長擴(kuò)增14 kb片段??
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圖. 以293T細(xì)胞總RNA為模板，使用11149ES進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，將得到的cDNA進(jìn)行PCR檢測。結(jié)果顯示，11149ES能夠滿足合成1 kb-14 kb長度的cDNA, 后續(xù)PCR有一定的適用場景。若需要直接反轉(zhuǎn)出10kb以上的片段，建議延長反轉(zhuǎn)錄時(shí)間至20-30分鐘，以保證最終片段的獲取。
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?反轉(zhuǎn)錄效率比對??
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RNA投入量 |
Ct值 |
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11149ES |
進(jìn)口A品牌 |
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1 μg |
15.2 |
15.5 |
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100 ng |
18.0 |
18.5 |
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10 ng |
21 |
21.7 |
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1 ng |
24.5 |
25.1 |
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100 pg |
29.1 |
29.7 |
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10 pg |
32.7 |
34.3 |
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圖. 以293T細(xì)胞總RNA為模板，使用11149ES、進(jìn)口A品牌進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，其中11149ES不進(jìn)行g(shù)DNA去除步驟，將得到的cDNA 進(jìn)行qPCR 定量分析。結(jié)果顯示，進(jìn)口A品牌反轉(zhuǎn)時(shí)間為13分鐘， 11149ES反轉(zhuǎn)時(shí)間為5分鐘，不同產(chǎn)物定量顯示，11149ES的Ct更小或者接近進(jìn)口競品，說明11149ES 5分鐘反轉(zhuǎn)效率優(yōu)于或近似進(jìn)口A品牌的反轉(zhuǎn)錄效率。
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RNA投入量 |
Ct值 |
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11149ES |
進(jìn)口B品牌 |
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1 μg |
16.2 |
17.4 |
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100 ng |
19.0 |
20.5 |
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10 ng |
22 |
23.8 |
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1 ng |
26 |
27.9 |
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100 pg |
31.4 |
33.2 |
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10 pg |
32.9 |
35.6 |
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圖. 以293T細(xì)胞總RNA為模板，使用11149ES、進(jìn)口B品牌進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，其中11149ES不進(jìn)行g(shù)DNA去除步驟，得到的cDNA 進(jìn)行qPCR 定量分析。結(jié)果顯示，進(jìn)口B品牌反轉(zhuǎn)時(shí)間為20分鐘，11149ES反轉(zhuǎn)時(shí)間為5分鐘，不同量底物定量顯示，11149ES的Ct更小或者接近進(jìn)口B品牌，說明11149ES 5分鐘反轉(zhuǎn)效率優(yōu)于或近似進(jìn)口B品牌的反轉(zhuǎn)錄效率。
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客戶體驗(yàn)反饋
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樣本來源：菊花葉片
客戶評價(jià)：與某進(jìn)口品牌效果相似，擴(kuò)增常規(guī)大小的片段效果不錯(cuò)。
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樣本來源：果*葉片
客戶評價(jià)：藍(lán)色很好看。
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樣本來源：水稻
客戶評價(jià)：與其他反轉(zhuǎn)錄試劑盒相比，節(jié)省加樣時(shí)間，節(jié)省反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí)間（其他試劑盒需要15+2 min，本試劑盒只需5 min），后續(xù)基因克隆DNA電泳結(jié)果證明，本試劑盒反轉(zhuǎn)效率更高，條帶更亮，所以會(huì)更節(jié)省PCR使用試劑，節(jié)省成本。
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方法 |
分類 |
產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
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RNA提取 |
同Trizol提取 |
TRIeasy? Total RNA Extraction Reagent |
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免氯仿升級版 |
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動(dòng)物組織/細(xì)胞總RNA提取，避開有毒試劑，最快15 min完成 |
MolPure??Cell/Tissue Total RNA Kit細(xì)胞/組織總RNA提取試劑盒 |
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qPCR染料法 |
高靈敏通用型定量預(yù)混液(染料法) |
Hieff UNICON??Universal Blue qPCR SYBR Master Mix |
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超高性價(jià)比定量預(yù)混液?(染料法)，已發(fā)文章累計(jì)IF達(dá)到5000+ |
Hieff??qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox) |
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Hieff??qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox) |
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Hieff??qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox) |
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反轉(zhuǎn)錄試劑 |
5 分鐘一步消化&反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液 |
Hifair??AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix for qPCR |
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5 分鐘快速反轉(zhuǎn)，最長可滿足14 kb cDNA合成，含gDNA去除(下游應(yīng)用PCR/qPCR)-示蹤版 |
Hifair??AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit |
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5 分鐘快速反轉(zhuǎn)，最長可滿足14 kb cDNA合成，含gDNA去除(下游應(yīng)用PCR/qPCR)-常規(guī)版 |
Hifair??AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit（No Dye） |
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高質(zhì)量第一鏈cDNA合成預(yù)混液，含gDNA去除(下游應(yīng)用qPCR) |
Hifair??III 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) |
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