THP-1細(xì)胞常用于多種科研實(shí)驗(yàn)，特別是與炎癥和免疫方向相關(guān)的研究。這是因?yàn)門(mén)HP-1細(xì)胞可分化為單核/巨噬細(xì)胞，這類(lèi)細(xì)胞在固有免疫系統(tǒng)中扮演著重要角色，能夠識(shí)別、吞噬和消化侵入機(jī)體的病原體或其他異物。同時(shí)，它們也是一類(lèi)主要的抗原提呈細(xì)胞，對(duì)特異性免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)起著關(guān)鍵作用。
啟達(dá)生物THP-1(貨號(hào)：CD0122)出庫(kù)圖
在特定的誘導(dǎo)條件下，例如使用佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯（PMA），THP-1細(xì)胞可以被誘導(dǎo)分化成巨噬細(xì)胞。進(jìn)一步地，通過(guò)添加不同的刺激因子，如脂多糖（LPS）和IFN-γ，可以將這些巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)成M1型巨噬細(xì)胞；或者通過(guò)添加IL-4、IL-13等因子，誘導(dǎo)為M2型巨噬細(xì)胞。
M1型巨噬細(xì)胞在炎癥反應(yīng)中扮演重要角色，它們富含溶酶體顆粒，可以通過(guò)產(chǎn)生反應(yīng)性中間物（ROI）、一氧化氮（NO）以及釋放溶酶體酶來(lái)殺傷和清除病原體。此外，M1型巨噬細(xì)胞還能合成并分泌如MCP-1、CCL3、CXCL8等趨化因子，以及IL-1β、IL-6、TNF-α等促炎因子，從而介導(dǎo)產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。
相比之下，M2型巨噬細(xì)胞則主要合成和分泌IL-10、TGF-β等因子，這些因子具有抑炎作用，并參與損傷組織的修復(fù)和纖維化過(guò)程。
除了上述應(yīng)用，THP-1細(xì)胞還可以用作體外癌細(xì)胞模型，研究單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞分化過(guò)程，以及檢查與巨噬細(xì)胞相關(guān)的某些生理過(guò)程（如膽固醇外流）的模型。此外，通過(guò)特定的刺激因子，THP-1細(xì)胞還可以分化為未成熟或成熟的樹(shù)突狀細(xì)胞，為相關(guān)研究提供重要的細(xì)胞模型。
這么強(qiáng)大的THP-1細(xì)胞，就看你怎么用來(lái)發(fā)揮實(shí)驗(yàn)的最大效果啦！
準(zhǔn)備材料：
Transwell inserts 0.4 μM，THP細(xì)胞（啟達(dá)生物，貨號(hào)：CD0122)，1640含有10%FBS的正常培養(yǎng)基（啟達(dá)生物 ，貨號(hào)：MD0201）
，IL4、IL13、IFN-γ儲(chǔ)備溶液、PMA（見(jiàn)實(shí)驗(yàn)步驟）LPS（見(jiàn)實(shí)驗(yàn)步驟）
實(shí)驗(yàn)試劑制備：
IL4原液、IL13原液、IFN-γ儲(chǔ)備溶液配制：在PBS含有0.05%BSA中制成100ug/ml，分裝并于-80°保存；使用時(shí)：在無(wú)菌PBS中稀釋至40µg/µl的濃度，然后等分并在-20°C下儲(chǔ)存
脂多糖:在無(wú)菌PBS中稀釋至40µg/µl的濃度，然后等分并在-20°C下儲(chǔ)存
實(shí)驗(yàn)步驟：
Day 1:
1.THP-1細(xì)胞在RPMI/FCS培養(yǎng)基中懸浮生長(zhǎng)，一旦接種到transwell插入物中就進(jìn)行激活。使用手套在插入物的無(wú)菌邊緣處理插入物。
2.使用血細(xì)胞儀對(duì)THP-1細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，制成濃度為1×105個(gè)細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸浮液。
3.然后通過(guò)每6個(gè)孔加入2ml RPMI/FCS培養(yǎng)基來(lái)制備一個(gè)6孔板。然后將transwell插入物放入含有2ml培養(yǎng)基的6孔中。
4.將2ml THP-1細(xì)胞懸浮液加入到插入物中（2x10^5個(gè)細(xì)胞/插入物）。
THP-1細(xì)胞一旦沉淀，立即用10 ng/ml 12-O-十四烷酰基horbol-l3-乙酸酯（PMA）處理24小時(shí)（1µl儲(chǔ)備溶液，總體積為4 ml）。
Day2：
1.在PMA中活化的THP-1細(xì)胞24小時(shí)后在transwell插入物分化。
2.通過(guò)添加2ml新鮮RPMI/FCS培養(yǎng)基來(lái)制備新的6孔板。
3.然后從含有活化THP-1細(xì)胞的插入物中輕輕吸出含有PMA的培養(yǎng)基，并將插入物轉(zhuǎn)移到新準(zhǔn)備好的6個(gè)孔板上
4.然后將2ml RPMI/FCS培養(yǎng)基加入插入物中，并在處理前放置1小時(shí)。
5.然后用所需的細(xì)胞因子混合物處理插入物：
A.M1分化可以通過(guò)用15 ng/ml脂多糖（LPS）（1.5µl儲(chǔ)備溶液轉(zhuǎn)化為4ml）或50 ng/ml IFN-γ（2µl儲(chǔ)備液轉(zhuǎn)化為4ml）處理來(lái)實(shí)現(xiàn)。
B.M2分化可以通過(guò)用25 ng/ml IL4和25 ng/ml IL13（1µl儲(chǔ)備溶液加入4 ml）聯(lián)合處理來(lái)實(shí)現(xiàn)
鑒定看這里哦
THP-1誘導(dǎo)完成后可通過(guò)流式和免疫熒光、ELISA或特異性標(biāo)記物（如IL1、IL10、精氨酸酶）的基因表達(dá)分析來(lái)評(píng)估向M1和M2型巨噬細(xì)胞的正確分化，并且從形態(tài)上也可以看出來(lái)，都是最基礎(chǔ)的鑒定方法，這就不一一述來(lái)了。
PMA刺激后的THP-1
THP-1細(xì)胞的誘導(dǎo)的M1形態(tài)（PMA)
Thp-1細(xì)胞誘導(dǎo)的M2形態(tài)（PMA)
THP-1誘導(dǎo)并不只是一條”路”，兩種方法都可以通羅馬
除了PMA方法外，還有ＧＭ?ＣＳＦ ／ Ｍ?ＣＳＦ都可以誘導(dǎo)出M1和M2細(xì)胞來(lái)，需要注意的是：ＧＭ? ＣＳＦ ／ Ｍ?ＣＳＦ 誘導(dǎo)出的 Ｍ１ 和 Ｍ２ 型巨噬細(xì)胞均為懸 浮生長(zhǎng)，ＤＣ 細(xì)胞處于半貼壁狀態(tài)，有利于細(xì)胞的獲 取再利用方面的研究，如流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)；ＰＭＡ 所 誘導(dǎo)出的 Ｍ１、Ｍ２ 和 ＤＣ 細(xì)胞貼壁較牢固，消化困 難，但其形態(tài)上更接近原代細(xì)胞，有利于細(xì)胞形態(tài)學(xué)方面的研究，如間接免疫熒光染色、激光共聚焦等。
參加文獻(xiàn)：
1. Vogelsang P, Karlsen M, Brun JG, et al. Altered phenolype andSlall expression in Toll-like receplor 7/8 slimulaled monoeyle-derived dendrilie cells from palients with primary Sjögren’ssyndrome[J]. Arthrilis Res Ther, 2014,16(4): R166.
2. Yang AX,Chong N, Jiang Y,el al. Molecular characterizationof antigen-peptide pulsed dendritie cells: immalure dendritie eellsdevelop a distinet molecular profile when pulsed with antigen peplide[J1.PloS 0ne,2014,9(1):e86306.
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