溶酶體組織蛋白酶（lysosomal cysteine cathepsins）能夠促進(jìn)蛋白水解進(jìn)而加速腫瘤的惡化和轉(zhuǎn)移。蛋白酶的活性由內(nèi)源抑制劑（endogenous inhibitors）調(diào)節(jié)控制。組織蛋白酶抑制劑stefin B(Stfb)在乳腺癌中到底有哪些作用呢？德國(guó)Albert-Ludwigs-University的C Peters教授和他的團(tuán)隊(duì)針對(duì)此項(xiàng)問題進(jìn)行研究，并于2015年8月發(fā)表于Nature雜志。
實(shí)驗(yàn)將Stfb裸鼠與患轉(zhuǎn)移PyMT乳腺癌的裸鼠雜交。結(jié)果顯示，缺失的Stfb的裸鼠的乳腺腫瘤尺寸減小，但是不會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)移的速度造成影響。Stfb缺失的小鼠腫瘤惡化的減少會(huì)同時(shí)伴隨死細(xì)胞的產(chǎn)生率升高。原發(fā)性PyMT腫瘤細(xì)胞體外分析與對(duì)照組細(xì)胞相比，消融的Stfb的表達(dá)對(duì)增殖，血管再生，轉(zhuǎn)移的影響不顯著。然而，與溶酶體藥劑Leu-Leu-OMe結(jié)合后，缺失Stfb的癌癥細(xì)胞更易凋亡。消融的Stfb腫瘤細(xì)胞在加大氧化應(yīng)激時(shí)更容易死亡。揭示了體內(nèi)Stfb在保護(hù)癌細(xì)胞的促氧化應(yīng)激性和通過溶酶體途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡方面的作用。
實(shí)驗(yàn)部分，利用Ki67染色強(qiáng)度對(duì)增殖期間過程進(jìn)行組化分析，CD31染色強(qiáng)度測(cè)量的細(xì)胞凋亡和腫瘤血管再生速率。
奧地利TissueGnostics公司的TissueQuest軟件對(duì)Ki67進(jìn)行定量分析（20個(gè)視野，40倍目鏡）。
圖中顯示乳腺癌后期的增殖樣本，細(xì)胞凋亡和血管密度。
（a）對(duì)14周的PyMT;Stfb+/+小鼠和PyMT;Stfb-/-的小鼠利用Ki67的原發(fā)性腫瘤檢測(cè)。40倍目鏡下的相對(duì)屬型影像。
（b）PyMT; Stfb+/+小鼠的Ki67的陽性細(xì)胞比例定量分析。
（c）凋亡細(xì)胞區(qū)域的免疫組化分析。
（d）凋亡細(xì)胞區(qū)域的比例。
利用HistoQuest 分析軟件對(duì)14周的PyMT;Stfb-/-型和PyMT;Stfb-/-小鼠乳腺癌腫瘤組織進(jìn)行Ki-67染色分析，使用流式散點(diǎn)圖定量分析方式對(duì)表達(dá)Ki-67的陽性細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)出Ki-67陽性細(xì)胞的比例。
相比傳統(tǒng)的分析方法，HistoQuest更加客觀、準(zhǔn)確、有效，并且可以對(duì)組織中全部細(xì)胞進(jìn)行分群，對(duì)細(xì)胞亞群進(jìn)行再分類、分析。并能夠在組織層面對(duì)單個(gè)細(xì)胞的染**況進(jìn)行準(zhǔn)確定量，不僅能分析胞漿蛋白，對(duì)胞膜、胞核蛋白也能原位定量分析。