自2023年11月，第一款自復(fù)制RNA（self-amplifying RNA, saRNA）疫苗在日本獲批上市以來(lái)，以saRNA技術(shù)路線為基礎(chǔ)的傳染病疫苗或腫瘤治療性疫苗已有多個(gè)項(xiàng)目開啟了臨床之路。saRNA模擬病毒復(fù)制模式，進(jìn)入細(xì)胞后進(jìn)行自我復(fù)制，從而在較低注射劑量的情況下，實(shí)現(xiàn)抗原的高表達(dá)，進(jìn)而產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng)。
saRNA結(jié)構(gòu)與復(fù)制原理
An Update on Self-Amplifying mRNA Vaccine Development. Vaccines (Basel). 2021
saRNA正鏈RNA分子，進(jìn)入細(xì)胞后，翻譯組裝形成RNA復(fù)制酶復(fù)合物(Rep)。一方面，Rep利用saRNA合成saRNA負(fù)鏈，再以負(fù)鏈為模板合成新的saRNA拷貝，實(shí)現(xiàn)saRNA的自擴(kuò)增。同時(shí)，Rep合成大量目的基因RNA，目的基因RNA翻譯出大量蛋白分子。
saRNA合成全流程解決方案
01 模板制備
在該環(huán)節(jié)中，高質(zhì)量的質(zhì)粒制備尤為重要，關(guān)系到后續(xù)體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的質(zhì)量。環(huán)狀質(zhì)粒由于無(wú)有效的終止，會(huì)轉(zhuǎn)錄出不同長(zhǎng)度的RNA產(chǎn)物。為了得到特定長(zhǎng)度的RNA，質(zhì)粒必須完全線性化，線性化的質(zhì)粒需確保雙鏈為平末端或5’端為突出結(jié)構(gòu)。近岸蛋白提供GMP級(jí)限制性內(nèi)切酶BsaI（目錄號(hào)：GMP-RE026/GMP-RE036）、BspQI（目錄號(hào)：GMP-RE057）、XbaI（目錄號(hào)：GMP-RE015）以及無(wú)動(dòng)物源性PmeI（目錄號(hào)：RE106），高效實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒線性化。
02 體外轉(zhuǎn)錄
T7 RNA Polymerase是體外轉(zhuǎn)錄生產(chǎn)治療用mRNA的關(guān)鍵酶。saRNA因添加了復(fù)制酶序列，導(dǎo)致其長(zhǎng)度過(guò)長(zhǎng)，通常會(huì)大于8Knt長(zhǎng)度，因此其轉(zhuǎn)錄難度增大，很難保證較好的完整性。同時(shí)因?yàn)樾蛄虚L(zhǎng)，dsRNA副產(chǎn)物也成為saRNA工藝的巨大難題。此時(shí)，一款可以顯著降低dsRNA雜質(zhì)，并且其他性能兼具的T7 RNA聚合酶成為關(guān)鍵點(diǎn)。近岸蛋白經(jīng)分子進(jìn)化改造獲得的T7 RNA聚合酶突變體（目錄號(hào)：GMP-E122）可顯著降低轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中dsRNA雜質(zhì)。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
·顯著降低dsRNA含量——增效
·帽結(jié)構(gòu)添加量可低至1mM——降本
·全能型選手
·兼容saRNA長(zhǎng)片段模板
10Knt saRNA片段采用不同添加量無(wú)機(jī)焦磷酸酶轉(zhuǎn)錄結(jié)果。
03 DNA模板去除
IVT反應(yīng)結(jié)束后，需要使用 DNase I去除 DNA 模板，以減少對(duì)后續(xù)反應(yīng)的影響。近岸蛋白GMP級(jí)DNase I（目錄號(hào)：GMP-E127）可有效消化雙鏈DNA模板，而對(duì)RNA無(wú)影響。
DNase I 去除RNA樣本中的DNA殘留
04 報(bào)告基因saRNA
eGFP saRNA（目錄號(hào)：MR301）轉(zhuǎn)染不同細(xì)胞24h后成功表達(dá)。
Luciferase saRNA（目錄號(hào)：MR302）轉(zhuǎn)染不同細(xì)胞后成功表達(dá)。隨著時(shí)間延長(zhǎng)，表達(dá)強(qiáng)度高于mRNA。
05 RNA藥物開發(fā)全流程解決方案
相關(guān)產(chǎn)品
