早產(chǎn)兒（＜28周&＜1000g）往往面臨著圍產(chǎn)期腦白質(zhì)損傷的巨大風(fēng)險，雖然腸道微生物與生命早期的發(fā)育有關(guān)，但目前研究人員并不是非常清楚早產(chǎn)兒個體中腸道微生物-免疫系統(tǒng)-腦軸之間的詳細關(guān)聯(lián)。近日，一篇發(fā)表在Cell Host & Microbe（IF 15.127）上題為“Aberrant gut microbiota-immune-brain axis development in premature neonates with brain damage”的研究報告中，來自維也納大學(xué)的研究團隊發(fā)現(xiàn)了一種治療大腦外損傷的早期療法的可能性靶點，腸道微生物在其中扮演關(guān)鍵角色，研究人員發(fā)現(xiàn)，胃腸道中克雷伯菌（Klebsiella）的過度生長或與早產(chǎn)兒特定免疫細胞數(shù)量的增加及神經(jīng)性損傷的發(fā)生直接相關(guān)。
研究材料
糞便和血液樣本，早產(chǎn)兒分娩后第3天、第7天、第14天，然后每兩周取樣一次，直至足月。
技術(shù)路線
· 步驟1：描述患者的神經(jīng)生理發(fā)育特征；
· 步驟2：與圍產(chǎn)期腦白質(zhì)損傷相關(guān)的T細胞動態(tài)發(fā)育；
· 步驟3：微生物群與腦損傷的相關(guān)性；
· 步驟4：SCFAs與腦損傷的相關(guān)性；
· 步驟5：篩選與腦損傷相關(guān)的生物標(biāo)志物。
研究結(jié)果
1. 神經(jīng)生理學(xué)特征預(yù)測腦損傷
2017年9月至2019年6月期間，研究團隊共招募了60名極早產(chǎn)兒。為了量化腦損傷，研究人員對神經(jīng)影像學(xué)的結(jié)果進行Kidokoro評分，正如預(yù)期的那樣，嚴(yán)重腦損傷嬰兒的Kidokoro評分更高；為了表征患者的神經(jīng)生理發(fā)育，采用振幅整合腦電圖（aEEG）評估，觀察到神經(jīng)生理學(xué)成熟的一致趨勢，其特征是一個初始靜止階段，DV（不連續(xù)電壓，discontinuousvoltage）是主要的aEEG模式，隨后是一段神經(jīng)生理學(xué)成熟期，在此階段CV（連續(xù)電壓，continuousvoltage）持續(xù)增加，最終在足月年齡時趨于穩(wěn)定。因此，腦損傷嬰兒成熟期延遲，神經(jīng)發(fā)育受到短暫抑制，且顱氧飽和度的不穩(wěn)定性增加，這些神經(jīng)生理學(xué)特征均可預(yù)測腦白質(zhì)損傷（PWMI），并且在病理學(xué)中起重要作用。
圖1 極早產(chǎn)兒的神經(jīng)生理學(xué)發(fā)育
2. 腦損傷早產(chǎn)兒表現(xiàn)出促炎性極化T細胞反應(yīng)
盡管T細胞是腸道微生物組和大腦之間的重要聯(lián)系，但它們在生命早期的個體發(fā)育以及它們與極早產(chǎn)兒圍產(chǎn)期腦損傷的關(guān)系仍然知之甚少。為了研究與圍產(chǎn)期腦損傷相關(guān)的T細胞動力學(xué)的時間變化，研究人員利用熒光激活細胞分選(FACS)研究了T細胞亞群，結(jié)果發(fā)現(xiàn)γδ T細胞的增加可能與PWMI的發(fā)病機制有關(guān)。這種細胞反應(yīng)起初與IL-8、IL-17a、VEGF-A和PDGF-BB的分泌相關(guān)。隨后，VEGF-A和γδ T細胞之間的密切聯(lián)系持續(xù)存在，而神經(jīng)保護劑PDGF-BB和BDNF的進一步分泌在患有嚴(yán)重腦損傷的嬰兒中受到抑制。
圖2 極早產(chǎn)兒的T細胞發(fā)育
3. Klebsiella的過度生長與腦損傷有關(guān)
微生物群是免疫耐受的重要發(fā)起者，因為微生物抗原的性質(zhì)和數(shù)量決定了淋巴細胞的反應(yīng)。因此研究人員采用16s rRNA測序來量化早產(chǎn)兒糞便樣本中的細菌數(shù)量及群落組成。隨著分娩后時間的推移，細菌的數(shù)量逐漸增加，并在分娩后2周趨于穩(wěn)定。其中，從患有嚴(yán)重腦損傷的早產(chǎn)兒糞便中分離出來的克雷伯菌與腦損傷存在顯著的相關(guān)性，該菌株基因組具有幾種潛在的毒力因子以及支持其在患有腸炎的腸道中定殖的基因。因此，Klebsiella在腸道中的過度生長與神經(jīng)病理學(xué)相關(guān)。
圖3 極早產(chǎn)兒的微生物組群及其與腦損傷對應(yīng)的多樣性
4. 腸道菌群和代謝物之間的動態(tài)變化與腦損傷之間的潛在聯(lián)系
雖然健康的成人腸道被認為是一個很大程度上缺氧的環(huán)境，但據(jù)報道早產(chǎn)兒的胃腸道部分缺氧，因此在產(chǎn)后發(fā)育過程中必須過渡到缺氧狀態(tài)。16s結(jié)果顯示，隨著時間的推移，專性厭氧類群的增加，反映了這種向缺氧的轉(zhuǎn)變。
在缺氧情況下，細菌必須通過底物的磷酸化獲得能量，而在腸道中，這通常是通過將膳食或宿主衍生化合物發(fā)酵成短鏈脂肪酸（SCFAs）來實現(xiàn)的，短鏈脂肪酸可作為神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)信號分子。因此，研究人員收集了分娩前和分娩后28天的樣本進行代謝組學(xué)檢測，評估SCFA與嚴(yán)重腦損傷的相關(guān)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在分娩前期，腦損傷患者的丁酸水平顯著升高，丙酸水平略微升高，但在以后的時間點沒有顯著差異，表明SCFA在早期向腸道缺氧過渡可能與腦損傷有關(guān)。
圖4 極早產(chǎn)兒糞便中的SCFAs
5. 可以預(yù)測PWMI的腸道微生物-免疫系統(tǒng)-腦軸的生物標(biāo)志物
為了確定可靠的腦損傷生物標(biāo)志物，研究人員對微生物組、代謝組、臨床、免疫學(xué)和神經(jīng)生理學(xué)數(shù)據(jù)進行了綜合分析。腦白質(zhì)損傷的最強指標(biāo)是Klebsiella水平升高、γδ T細胞的增加，以及促進T細胞生成的幾種細胞因子和趨化因子的增加。幾種數(shù)據(jù)集之間的相關(guān)性分析表明，Klebsiella與γδ T細胞、免疫因子（VEGF-A、PDGF-BB和BDNF）顯著相關(guān)。
圖5 極早產(chǎn)兒腸道微生物群免疫腦軸與腦損傷生物標(biāo)志物
小編小結(jié)
腸道、大腦和免疫系統(tǒng)的早期發(fā)展是密切相關(guān)的，早產(chǎn)兒遭受圍產(chǎn)期腦白質(zhì)損傷的風(fēng)險很大，但具體機制尚未知。本研究分析了60例接受了包括抗生素和益生菌在內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)院護理的極度早產(chǎn)兒的腸道菌群、免疫學(xué)和神經(jīng)生理發(fā)育情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)患有嚴(yán)重腦損傷的嬰兒表現(xiàn)出促炎性T細胞極化，其表現(xiàn)為外周血中γδ T細胞的擴張，并在分娩后不久由升高的IL-17a和VEGF-a分泌驅(qū)動。隨后，這些嬰兒的神經(jīng)生理學(xué)成熟開始延遲，其特征是皮層電位受到抑制，頭顱氧飽和度增加不穩(wěn)定性，以及神經(jīng)保護劑PDGF-BB和BDNF分泌不足。腸道中的克雷伯菌過度生長是促使與嚴(yán)重腦損傷相關(guān)的獨特且非常穩(wěn)定的微生物組的關(guān)鍵。因此，我們得出結(jié)論，Klebsiella參與腸道微生物群-免疫系統(tǒng)-腦軸的調(diào)節(jié)，并可能加重PWMI。
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腸-免疫-靶軸系統(tǒng)研究方案
· 16s/宏基因組----腸道微生物的組成及改變
· 免疫代謝組----腸道微生物產(chǎn)生的用于調(diào)控機體免疫的代謝物
· 免疫因子組----腸道微生物如何影響機體免疫
· 轉(zhuǎn)錄/蛋白質(zhì)組----對終端靶器官應(yīng)對炎癥響應(yīng)機制的系統(tǒng)描述
