杜氏肌營養不良癥（DMD）是一種致命的神經肌肉疾病，其臨床表現是由于缺乏功能性肌肉營養不良蛋白而引起的進行性肌肉萎縮，病人平均壽命僅20歲左右。到目前為止，臨床上尚無完全治愈DMD的方法。 對DMD治療研究主要集中于緩解DMD病人肌肉萎縮癥狀及恢復功能性dystrophin蛋白表達,其中以肌肉生長抑制因子(myostatin)為主要作用靶點的輔助治療研究受到廣泛關注。
肌肉生長抑制素（Myostatin）是在肌肉發育過程中充當肌肉生長負性調控因子。抑制肌肉生長抑制素可減輕DMD小鼠的病理進展。眾所周知,短肽在血液中極不穩定,半衰期較短,前期研究發現,哺乳類細胞分泌的一種納米級囊泡結構-外泌體(exosome),可作為蛋白和核酸藥物的運輸載體,并對核酸起到一定保護作用。
外泌體（exosomes）是一種能被機體內大多數細胞分泌的天然生物納米顆粒，廣泛存在分布在體液中，攜帶和傳遞重要的信號分子，形成了種全新的細胞-細胞間信息傳遞系統。影響細胞的生理狀態并與多種疾病的發生與進程密切相關。
天津醫科大學細胞生物學系和免疫微環境重點實驗室尹海芳教授課題組利用杜興肌肉萎縮癥小鼠模型(mdx小鼠),系統研究exosome作為propeptide短肽運輸載體的可行性和應用潛力,通過檢測負載propeptide短肽的exosome對DMD肌肉的改善作用,以期待為DMD治療提供一種新型藥物運輸載體和治療手段。實驗證明，通過將肌肉生長抑制素前肽的抑制結構域融合到CD63的第二個細胞外環（EXOpro）中，將前肽錨定在外泌體表面，可以顯著提高前肽的血清穩定性，遞送效率和功效。重復施加EXOpro可加速肌肉再生和生長，從而導致肌肉的質量顯著增加且功能逐漸恢復，并且在mdx小鼠中沒有檢測到毒性。更重要的是，EXOpro加入可部分恢復mdx小鼠的骨骼結構并促進骨骼再生。
結果表明，外泌體錨定增加了前肽的釋放和血清穩定性，增強了肌生成抑制蛋白前肽的抑制作用，從而為基于前肽的DMD干預提供了一個傳遞平臺。
實驗部分
實驗部分采用TissueGnostics公司TissueFAXS系統對免疫組化免疫熒光樣本獲取圖像，StrataQuest定量分析軟件對肌肉生長抑制素前肽陽性率進行分析。
首先采用2.5X物鏡對明場染色的組織切片樣本進行組織區域識別，然后采用20X物鏡對識別的組織區域進行全景掃描成像，再將獲取的組織全景圖像導入組織微環境定量分析軟件中，運用自動拆色功能，可將復染的組織樣本圖一鍵轉換為單通道圖像，再運用TG**的組織原位單細胞識別及定量分析技術，最終獲得DAB染色陽性率數據。
圖1 血清和組織中EXOpro與M-MSTN結合效率檢測
在用EXOpro處理的小鼠的四頭肌中，從2h到24h存在大量特異性染色的前肽，并在注射后1周仍可檢出（圖1H和1I）。
圖2 CTX損傷的C57BL / 6小鼠中EXOpro和前肽研究
（B）EXOpro，EXO，前肽處理的小鼠和對照組的四頭肌中前肽的免疫組化樣本。箭頭指向前肽染色陽性部分。（C）利用HE染色檢測損傷組織形態及肌纖維面積、IHC檢測胚胎肌球重鏈(e My HC)表達以評估修復效果。