限制性內(nèi)切酶在特定識(shí)別位點(diǎn)切割DNA的特性，使得這些酶在分子生物學(xué)技術(shù)中成為必不可少的核心工具。其可在分子克隆、mRNA轉(zhuǎn)錄模板制備、基因定位和分離等等應(yīng)用領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。近年來，以病毒包裝為基礎(chǔ)的基因治療技術(shù)以及mRNA技術(shù)，逐漸在新型療法中凸顯出來。其中病毒包裝中的質(zhì)粒構(gòu)建和mRNA轉(zhuǎn)錄中的模板制備均需要無動(dòng)物源性限制性內(nèi)切酶的引入使用。
繼BspQI、BsaI、XbaI及PmeI后，近岸蛋白再添無動(dòng)物源性NotI及HindIII限制性內(nèi)切酶。
識(shí)別位點(diǎn)
產(chǎn)品特點(diǎn)
高效切割含特異性位點(diǎn)質(zhì)粒底物
M：DNA Marker 1/3：陰性 2：品牌A 4：Novoprotein
50μl反應(yīng)體系中，10U不同品牌NotI與1µg質(zhì)粒進(jìn)行酶切，37℃孵育1h，質(zhì)粒被完全線性化。
M：DNA Marker 2：品牌A 4：Novoprotein
50μl反應(yīng)體系中，10U不同品牌HindIII與1µg質(zhì)粒進(jìn)行酶切，37℃孵育1h，質(zhì)粒被完全切割。
無非特異性核酸內(nèi)切酶活性
M：DNA Marker 1：陰性 2：品牌A 3：Novoprotein
50μl反應(yīng)體系中，100U過量不同品牌NotI與1µg無NotI酶切位點(diǎn)的質(zhì)粒混合，37℃孵育3h，Novoprotein NotI無明顯非特異性內(nèi)切酶活性，而品牌A產(chǎn)生了明顯的非特異性切割。
M：DNA Marker 1：陰性 2/3：品牌A（添加量20U/100U） 4/5：Novoprotein（添加量20U/100U）
50μl反應(yīng)體系中，分別用20U和100U過量不同品牌HindIII與1µg無HindIII酶切位點(diǎn)的質(zhì)粒混合，37℃孵育3h，無明顯非特異性內(nèi)切酶活性。
無非特異性核酸外切酶活性
M：DNA Marker 1：陰性 2：品牌A（添加量20U） 3/4：Novoprotein（添加量20U/100U）
50μl反應(yīng)體系中，分別用20U和100U過量不同品牌NotI與1µg λ HindIII DNA混合，37℃過夜孵育，無明顯非特異性外切酶活性。
M：DNA Marker 1：陰性 2：品牌A（添加量20U） 3/4/5：Novoprotein（添加量10U/20U/100U）
50μl反應(yīng)體系中，分別用10U、20U和100U不同品牌HindIII與1µg λ HindIII DNA混合，37℃過夜孵育，無明顯非特異性外切酶活性。
更多主流限制性內(nèi)切酶還有酶切后形成5’末端突出結(jié)構(gòu)或平末端結(jié)構(gòu)的XbaI酶和PmeI。以及IIS型限制性內(nèi)切酶BspQI、BsaI，其酶切位點(diǎn)在識(shí)別位點(diǎn)以外，酶切后可將mRNA的Poly A結(jié)構(gòu)直接暴露在3’端而不產(chǎn)生冗余的酶切位點(diǎn)殘基，從根本上杜絕多余堿基造成的不確定性。
近岸蛋白在推動(dòng)生物藥研發(fā)生產(chǎn)過程中不斷探索創(chuàng)新，GMP級(jí)限制性內(nèi)切酶BsaI、BspQI和XbaI，無動(dòng)物源性PmeI、NotI及HindIII，為客戶提供更多的酶切位點(diǎn)選擇。