鄭州大學(xué)袁寶銀、劉康棟老師團隊在Analytical Chemistry（IF：8.008）上發(fā)表題為“DNA Aptamer Selected against Esophageal Squamous Cell Carcinoma for Tissue Imaging and Targeted Therapy with Integrin β1 as a Molecular Target”的文章。在該研究中，研究團隊通過Cell-SELEX技術(shù)篩選出可以特異性識別ESCC細胞系的核酸適配體，且通過組織成像證明核酸適配體 A2可識別病人食管鱗癌組織，該團隊還通過Pull-down、質(zhì)譜實驗（由吉凱基因提供技術(shù)服務(wù)）及siRNA干擾技術(shù)鑒定該aptamer結(jié)合的靶標為整合素β1。此外，該團隊通過構(gòu)建A2-NA納米結(jié)構(gòu)負載化療藥物阿霉素（Dox），實現(xiàn)了體外和體內(nèi)靶腫瘤細胞的特異性殺傷。
研究結(jié)果
1.?利用Cell-SELEX技術(shù)篩選得到與靶細胞高親和力結(jié)合的核酸適配體
A2、A3、A4核酸適配體與靶細胞結(jié)合的解離常數(shù)均為納摩爾級別，三條核酸適配體均能夠結(jié)合在靶細胞的細胞膜上，核酸適配體A2能夠特異性識別病人食管鱗癌組織。
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【補充知識】：
SELEX技術(shù)即指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進化技術(shù)(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX)。利用該技術(shù)可以從隨機單鏈核酸序列庫中篩選出特異性與靶物質(zhì)高度親和的核酸適體（Aptamer）。Cell-SELEX技術(shù)是在SELEX技術(shù)基礎(chǔ)上，獲取能與特定靶細胞結(jié)合的適配體的方法。
2.?核酸適配體A2與靶細胞結(jié)合的分子靶標為整合素β1（Integrin β1）
利用流式細胞術(shù)初步驗證出核酸適配體A2與靶細胞結(jié)合的靶標為蛋白質(zhì)，利用Pull-down實驗及質(zhì)譜技術(shù)（由吉凱基因提供技術(shù)服務(wù)）、基因敲低實驗進一步驗證出A2結(jié)合靶標為Integrin β1。此外，通過分子對接技術(shù)準確地預(yù)測出A2與Integrin β1的具體結(jié)合位點。
3.?設(shè)計A2連接的DNA納米結(jié)構(gòu)，實現(xiàn)化療藥物Dox的靶向遞送
利用HCR（雜交鏈式反應(yīng)）原理，設(shè)計出A2連接的DNA納米結(jié)構(gòu)，該納米結(jié)構(gòu)能夠負載自身濃度100倍的Dox，并將其靶向遞送至靶腫瘤細胞中，降低化療藥物的毒副作用。
研究結(jié)論
（1）通過Cell-SELEX，篩選得到與低分化食管鱗癌KYSE410細胞高親和力高特異性結(jié)合的核酸適配體，其中核酸適配體A2能夠特異性成像患者食管鱗癌組織，有望作為一種特異性成像探針應(yīng)用于食管鱗癌的診斷；
（2）經(jīng)鑒定核酸適配體A2與靶細胞結(jié)合的主靶標為整合素β1，具備作為食管鱗癌標志物和治療靶點的潛力；
（3）以核酸適配體A2為靶向分子設(shè)計并構(gòu)建了A2-NA納米結(jié)構(gòu)，該納米結(jié)構(gòu)能夠負載高濃度的Dox并將其特異性遞送至靶細胞，實現(xiàn)腫瘤的靶向治療。
吉凱助力
本研究使用質(zhì)譜檢測核酸適配體A2結(jié)合的目標蛋白，由吉凱基因提供技術(shù)服務(wù)。
作者介紹
袁寶銀
鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)系副教授，主要研究方向為基于核酸適配體的腫瘤檢測與治療。
吉凱基因憑借多年在靶標篩選及驗證服務(wù)領(lǐng)域的技術(shù)積累，建立的標準化 、工程化 、系統(tǒng)化的GRP平臺，為中國研究型醫(yī)生提供科研服務(wù)，加快科研成果轉(zhuǎn)化。其中，多組學(xué)平臺包含蛋白質(zhì)組學(xué)平臺和高通量測序平臺：
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