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EdU系列熒光檢測產(chǎn)品

------照亮你的視野

>>>背景導(dǎo)讀

測定DNA合成情況是細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞毒性、DNA復(fù)制及修復(fù)、信號通路等研究方向常用方法之一，用到的檢測試劑主要是胸腺嘧啶核苷酸類似物（BrdU、EdU），兩種試劑在檢測方面有一些不同之處。BrdU免疫檢測需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合，而EdU因為其特有的炔羥基團(tuán)可以與一些熒光染料發(fā)生“Click”化學(xué)反應(yīng)，無需變形，從而將細(xì)胞標(biāo)記上熒光，因此應(yīng)用更廣泛。

>>>EdU和Brdu檢測區(qū)別

BrdU?檢測增殖細(xì)胞的特點及原理

BrdU（5-Bromo-2-deoxyUridine，5-溴脫氧尿嘧啶核苷）是一種嘧啶類似物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)特點是溴替代了胸腺嘧啶環(huán)與５位C原子連接的甲基可競爭性摻入到S期新合成的DNA中。BrdU在細(xì)胞周期的S期和細(xì)胞一起孵育的BrdU能滲入DNA分子中，再結(jié)合BrdU抗體與滲入DNA的BrdU特異性結(jié)合就能夠檢測到DNA復(fù)制活躍的細(xì)胞。但BrdU免疫檢測有其缺點就是需要變性DNA（必須用高濃度的鹽酸，乙酸或酶解處理）后才能與抗體結(jié)合，但這就破壞了DNA雙鏈結(jié)構(gòu)，影響了其他染料的結(jié)合染色，導(dǎo)致染色彌散，準(zhǔn)確性降低等問題。

圖1：BrdU滲入DNA分子過程

EdU?檢測增殖細(xì)胞的特點及原理

EdU（５‐ethynyl‐２′‐deoxyuridine，５‐乙炔基‐２′脫氧尿嘧啶核苷）也是一種胸腺嘧啶核苷的類似物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)特點是脫氧胸腺嘧啶環(huán)上與５位C原子相連的甲基被乙炔基取代，在S期細(xì)胞增殖時可作為底物摻入到正在復(fù)制的DNA鏈中，

EdU在細(xì)胞增殖時能夠插入正在復(fù)制的DNA分子中，基于EdU與染料的共軛反應(yīng)可以有效地檢測處于S期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。熒光染料可以同EdU發(fā)生“Click”化學(xué)反應(yīng)（點擊法），從而將增殖的細(xì)胞標(biāo)記上熒光。可用于細(xì)胞成像、流式、細(xì)胞示蹤、DNA損傷修復(fù)檢測、線粒體活性檢測以及病毒增殖活性檢測等，EdU亦適用于活體注射，穩(wěn)定，對活體無副作用。

與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比，EdU檢測法更簡單、更快速、更準(zhǔn)確，不需要嚴(yán)格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理，有效地避免了樣品損傷，有助于在組織、器官的整體水平上觀測細(xì)胞增殖的真實情況，具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。

圖2：EdU滲入DNA分子過程

表1：EDU和Brdu標(biāo)記方法對比區(qū)別

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>>>什么是“點擊法”

基于EdU的點擊法標(biāo)記技術(shù)是由銅催化的疊氮化物-炔烴環(huán)加成反應(yīng)（圖3），將其應(yīng)用于細(xì)胞的原位標(biāo)記需兩步過程。首先，其中一個生物反應(yīng)配體是由疊氮化物或炔烴與“構(gòu)件”（如核苷酸，核苷，氨基酸，單糖或脂肪酸）連接構(gòu)成；隨后將另一是由熒光染料、生物素或其他檢測試劑連接的互補炔烴或疊氮化物構(gòu)成的反應(yīng)配體在催化劑銅的存在條件下“點擊”到位，完成反應(yīng)

點擊化學(xué)與使用溴脫氧尿苷(BrdU)檢測法不同，EdU點擊檢測法不是基于抗體，無需DNA變性即可檢測摻入的核苷。EdU點擊檢測法可以與R-PE、GFP等熒光蛋白復(fù)用提高效力，該技術(shù)的優(yōu)勢在于化學(xué)方面獨特的小分子和低背景的標(biāo)記物以及檢測基團(tuán)之間特異性共價反應(yīng)。小分子的疊氮化物試劑可以有效地接觸DNA而無需對細(xì)胞進(jìn)行破壞處理。進(jìn)而簡化了測定流程并且獲得的結(jié)果與使用傳統(tǒng)的BrdU相似或更好

圖3：Click-iT EdU點擊法檢測核酸過程

>>>EdU系列產(chǎn)品特點

熒光染料可以在銅離子催化下同EdU發(fā)生“Click”化學(xué)反應(yīng)，將增細(xì)胞標(biāo)記上相關(guān)的熒光。可用于細(xì)胞成像、流式、細(xì)胞示蹤、DNA損傷修復(fù)檢測以及病毒增殖活性檢測等，EdU亦適用于活體注射，穩(wěn)定，對活體無副作用。

EdU檢測的優(yōu)點：

?操作簡單—?僅需EdU孵育；細(xì)胞固定化；熒光檢測三步；

?檢測快速—?只需2.5 h；

?結(jié)果準(zhǔn)確—?標(biāo)記率高且無需變性，更好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)；

?兼容性高—?允許與多種抗體、熒光染料同時標(biāo)記；

?應(yīng)用性廣—?細(xì)胞成像、流式、細(xì)胞示蹤、DNA損傷修復(fù)檢測、病毒增殖活性檢測等。

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1、Click-iT EdU熒光成像觀察（綠色、紅色、遠(yuǎn)紅色）

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2、Click-iT EdU流式細(xì)胞儀觀察（綠色、紅色、遠(yuǎn)紅色）

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