編者按
當(dāng)前，三陰性乳腺癌（TNBC）作為最具侵襲性和治療挑戰(zhàn)性的乳腺癌亞型之一，在乳腺癌的諸多分型中堪稱“癌王”。它易轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)，且對(duì)許多常規(guī)療法不敏感，治療選擇有限，患者預(yù)后極差。近年來(lái)，嵌合抗原受體（CAR）T細(xì)胞療法在多種癌癥中顯示出巨大潛力，但卻常常面臨著腫瘤抗原逃逸、腫瘤異質(zhì)性等挑戰(zhàn)。
3月3日，中國(guó)科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院萬(wàn)曉春教授研究團(tuán)隊(duì)聯(lián)合中國(guó)科學(xué)院大學(xué)、陸軍軍醫(yī)大學(xué)陸軍特色醫(yī)學(xué)中心（大坪醫(yī)院）消化內(nèi)科、環(huán)特生物等在權(quán)威期刊Experimental Hematology & Oncology（IF=13.5）上發(fā)表最新研究成果。該研究開發(fā)了一種新型的雙靶向CAR-T細(xì)胞療法——BiTES-CAR-T，可以同時(shí)靶向MSLN和NKG2DL，并首次在斑馬魚TNBC異種移植模型中驗(yàn)證了該療法的抗腫瘤活性，有效克服了TNBC的抗原異質(zhì)性和潛在的免疫逃逸，是一種極具潛力的三陰性乳腺癌（TNBC）治療策略，具有良好的轉(zhuǎn)化應(yīng)用前景。
本研究中，環(huán)特生物提供的斑馬魚PDX等實(shí)驗(yàn)服務(wù)支持，進(jìn)一步驗(yàn)證了BiTEs CAR-T可以顯著降低腫瘤熒光強(qiáng)度，展現(xiàn)出對(duì)TNBC的顯著療效。
01、研究亮點(diǎn)
提出了一種新型CAR-T策略——雙特異性BiTES-CAR-T，具有低免疫原性、高穩(wěn)定性、雙靶向殺傷能力，用于治療三陰性乳腺癌（TNBC）；
通過(guò)細(xì)胞、小鼠等多模型驗(yàn)證該療效，并首次在斑馬魚TNBC異種移植模型中驗(yàn)證了該療法的抗腫瘤活性，表明其巨大的臨床轉(zhuǎn)化潛力；
采用納米抗體和NKG2D胞外區(qū)設(shè)計(jì)，降低了免疫原性，提高了穩(wěn)定性，為三陰性乳腺癌治療提供了新視角。
02、主要研究成果
1. 核心策略：雙特異性BiTES-CAR-T的開發(fā)
針對(duì)TNBC治療中腫瘤抗原異質(zhì)性和免疫逃逸兩大挑戰(zhàn)，研究人員開發(fā)了一種新型的雙特異性T細(xì)胞銜接器(BiTES)分泌型CAR-T細(xì)胞——BiTES-CAR-T，可以同時(shí)靶向間皮素（MSLN） 和NKG2D配體（NKG2DL） 。
TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析顯示，TNBC組織中MSLN和NKG2DL表達(dá)高，但相關(guān)性弱；免疫組化驗(yàn)證結(jié)果顯示，71.05%的TNBC樣本中MSLN呈陽(yáng)性，55.26%的樣本中MICA/B呈陽(yáng)性，而僅有15.79%的樣本中，兩者均為陰性。MSLN相對(duì)更特異于腫瘤；NKG2DL可能被感染或由化療誘導(dǎo)產(chǎn)生。
圖1
2. BiTES-CAR-T的構(gòu)建
隨后，研究人員使用結(jié)構(gòu)小、穩(wěn)定且免疫原性低的納米抗體（VHH）來(lái)靶向MSLN，并以NKG2D天然受體的胞外域替代傳統(tǒng)scFv來(lái)靶向NKG2DL，顯著降低了CAR-T細(xì)胞的免疫原性和聚集風(fēng)險(xiǎn)，提高了穩(wěn)定性，并成功構(gòu)建了BITES CAR-T細(xì)胞。
流式細(xì)胞術(shù)(FACS)顯示出T細(xì)胞表面MSLN CAR的表達(dá)；Western Blot和ELISA證實(shí)了培養(yǎng)上清液中，存在BITES的分泌；BITES CAR-T的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率略低于MSLN CAR-T，但CD4/CD8比例無(wú)顯著變化。
3. BiTES-CAR-T的功能驗(yàn)證與體外殺傷效果
研究人員發(fā)現(xiàn)，分泌的BiTES能高效地與T細(xì)胞上的CD3和腫瘤細(xì)胞上的 NKG2DL結(jié)合。BiTEs CAR-T在共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，表現(xiàn)出比單靶向MSLN CAR-T更強(qiáng)的細(xì)胞毒性，并能有效激活未轉(zhuǎn)導(dǎo)的T細(xì)胞，提升其殺傷能力。
在模擬抗原異質(zhì)性的混合腫瘤細(xì)胞中，BiTEs CAR-T能顯著提升IFN-γ、TNF-α、顆粒酶等細(xì)胞因子的分泌水平，并增強(qiáng)T細(xì)胞表面激活標(biāo)志物CD25和CD69的表達(dá)。
4. 斑馬魚、小鼠模型驗(yàn)證其可以顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)
研究人員構(gòu)建了斑馬魚TNBC異種移植模型，首次在斑馬魚中評(píng)估BiTES CAR-T的療效。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，BITES CAR-T顯著降低了腫瘤熒光強(qiáng)度，表明其可以有效誘導(dǎo)腫瘤消退。
隨后，通過(guò)構(gòu)建小鼠TNBC模型，在小鼠模型中進(jìn)一步證實(shí)了其療效。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，BiTES CAR-T有效減小了腫瘤體積，并延長(zhǎng)了生存期，優(yōu)于MSLN CAR-T，但未觀察到顯著的體重下降。這表明能顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)、延長(zhǎng)生存期，且未引起明顯毒性反應(yīng)，其毒性可控。治療后小鼠血液中IFN-γ水平和CD3+ T細(xì)胞比例均顯著升高，表明其具有良好的體內(nèi)持久性與活性。
圖2
本研究中，環(huán)特生物提供了斑馬魚PDX等實(shí)驗(yàn)服務(wù)支持，多維度驗(yàn)證了BiTES CAR-T強(qiáng)大的抗腫瘤活性和安全性。
03、編者點(diǎn)評(píng)
本研究首次開發(fā)了一種新型的CAR-T策略——雙特異性BiTES-CAR-T，可以同時(shí)靶向MSLN和NKG2DL，有效克服了TNBC的抗原異質(zhì)性和潛在的免疫逃逸，并利用斑馬魚等體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)了其對(duì)TNBC的強(qiáng)大抗腫瘤活性和安全性。BiTES CAR-T作為一種極具潛力的TNBC治療策略，具有良好的轉(zhuǎn)化應(yīng)用前景。
作為健康美麗產(chǎn)業(yè)CRO服務(wù)開拓者與引領(lǐng)者、斑馬魚生物技術(shù)的全球領(lǐng)導(dǎo)者，環(huán)特生物搭建了“斑馬魚、基因編輯、類器官、哺乳動(dòng)物、人體”等多維生物技術(shù)服務(wù)體系，開展健康美麗CRO服務(wù)、科研服務(wù)、智慧實(shí)驗(yàn)室搭建三大業(yè)務(wù)。目前，環(huán)特已建立200多種斑馬魚模型，腦類器官、胃癌、心臟類器官及各種腫瘤類器官培養(yǎng)平臺(tái)，歡迎有需要的讀者垂詢！
參考文獻(xiàn)：
Muhammad Auwal Saliu, Qi Wang,Xiaochun Wan et al. Mesothelin-targeted CAR-T cells secreting NKG2D-BiTEs exhibit potent efficacy against triple-negative breast cancer. Experimental Hematology & Oncology.2025. DOI: 10.1186/s40164-025-00621-y