01
前 言
基質(zhì)膠是3D細(xì)胞培養(yǎng)、類器官、成瘤、侵襲、血管生成等實(shí)驗(yàn)的“萬(wàn)能支架”。然而，從解凍到鋪板，從濃度選擇到結(jié)果判讀，稍不留神就可能“翻車”。翌圣生物結(jié)合上萬(wàn)次實(shí)驗(yàn)反饋，整理出這份“避坑指南”，助你一次上手，穩(wěn)拿高分?jǐn)?shù)據(jù)。
02
到貨 & 儲(chǔ)存
|
問(wèn)題 |
翌圣建議 |
|
收到貨后如何保存？ |
將本產(chǎn)品置于-20℃環(huán)境存放；若短暫放置，4 ℃不超過(guò)7天。 |
|
能否反復(fù)凍融？ |
不建議反復(fù)凍融；首次融化后立即分裝（200 µL/管），-20 ℃保存。 |
|
如何進(jìn)行融化？ |
冷凍狀態(tài)的基質(zhì)膠可以在操作前一天埋藏于碎冰中，再轉(zhuǎn)移入4 ℃冰箱，次日即可使用。適當(dāng)延長(zhǎng)4℃融化時(shí)間可以有效減少基質(zhì)膠中的氣泡。 |
03
顏色/濃度怎么選？
|
類型 |
特點(diǎn) |
適用場(chǎng)景 |
|
含酚紅 |
pH指示 |
常規(guī)實(shí)驗(yàn)都可以使用含酚紅產(chǎn)品，由于酚紅存在時(shí)，在溫度、pH不同的情況下液體會(huì)出現(xiàn)顏色的差異，顏色可以在明黃色至暗紅色之間變化。 |
|
無(wú)酚紅 |
無(wú)顏色干擾 |
涉及顏色檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)，推薦使用不含酚紅的基質(zhì)膠，如對(duì)子宮內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)必須使用不含酚紅的基質(zhì)膠。此外，酚紅是一種潛在的內(nèi)分泌干擾物，有可能會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)激素的自然產(chǎn)生和代謝能力。 |
|
標(biāo)準(zhǔn)濃度 |
蛋白濃度：8 - 12 mg/mL |
Transwell實(shí)驗(yàn)、皮下成瘤實(shí)驗(yàn) |
|
高濃度 |
蛋白濃度：18 - 22 mg/mL，凝膠3-5 min |
皮下成瘤中較難成瘤的細(xì)胞系 |
|
低生長(zhǎng)因子 |
標(biāo)準(zhǔn)濃度基質(zhì)膠的基礎(chǔ)上做了減生長(zhǎng)因子處理 |
類器官培養(yǎng)、血管生成 |
04
實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)
|
場(chǎng)景 |
高頻問(wèn)題 |
解決錦囊 |
|
皮下成瘤 |
荷瘤不成功可能的原因 |
取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，細(xì)胞達(dá) 80 - 90% 左右密度為宜 |
|
選擇 4 - 6 周齡裸鼠，小于 4 周可能不耐受過(guò)早死亡，大于 6 周免疫力會(huì)增強(qiáng)，不易成瘤。 |
||
|
可能是小鼠免疫排斥，建議更換免疫缺陷程度更大的小鼠 |
||
|
可以在接種后一周補(bǔ)種1次，可以很好的提高成功率 |
||
|
腫瘤長(zhǎng)起來(lái)后又消失的原因 |
很可能是由于炎癥反應(yīng)，腫瘤細(xì)胞被小鼠自身吸收造成的。若后續(xù)腫瘤依舊未長(zhǎng)出來(lái)，可考慮更換免疫缺陷程度更大的小鼠。 |
|
|
血管生成 |
成管實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞 不能形成連續(xù)的網(wǎng)格 |
建議使用3-5代狀態(tài)較好且融合度70%-80%的HUVEC細(xì)胞 |
|
細(xì)胞數(shù)量過(guò)少會(huì)使細(xì)胞無(wú)法形成連續(xù)的網(wǎng)絡(luò) |
||
|
4 - 18 h可見血管生成。建議每4個(gè)小時(shí)觀察一次。 |
||
|
侵襲實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞不轉(zhuǎn)移 |
細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力比較弱 |
|
細(xì)胞的活性太差，活性不好的細(xì)胞做侵襲實(shí)驗(yàn)難度較大 |
||
|
用胰酶消化后，必須將含血清的培養(yǎng)基洗去 |
||
|
類器官實(shí)驗(yàn) |
類器官傳代的標(biāo)準(zhǔn) |
不同類器官時(shí)間不同，通常7-14日、直徑100-200um左右可以傳代，有些發(fā)育慢的可能要數(shù)周才能發(fā)育到適合傳代狀態(tài)。 |
|
鑒定類器官的方法 |
最基礎(chǔ)的通過(guò)顯微鏡和H&E染色觀察類器官形態(tài)；進(jìn)一步可以用免疫熒光檢測(cè)該類器官是否表達(dá)相應(yīng)的biomarker； |
|
|
為什么觀察到的形態(tài)卻和文獻(xiàn)不一致？ |
決定類器官形態(tài)的因素有很多，樣本來(lái)源是否相同、選用的細(xì)胞因子品質(zhì)是否有差異都有可能改變最終的類器官形態(tài)。 |
05
產(chǎn)品詳情
|
產(chǎn)品名稱 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
|
Ceturegel® Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠 |
40183ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
|
Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40184ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
|
Ceturegel® Matrix GFR，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40185ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
|
Ceturegel® Matrix GFR，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40186ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
|
Ceturegel® Matrix High Concentration，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40187ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
|
Ceturegel® Matrix High Concentration，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40188ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
|
Ceturegel® Matrix High Concentration，GFR，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40189ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
|
Ceturegel® Matrix hESC-Qualified，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40190ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
|
Ceturegel® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40191ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
|
Ceturegel® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free Plus基質(zhì)膠 |
40192ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |