T4 DNA連接酶（T4 DNA Ligase）是一種由T4噬菌體編碼的酶，以ATP作為輔因子，催化雙鏈DNA或RNA的5’-磷酸與3’-羥基之間形成磷酸二酯鍵。該酶既能催化黏性末端分子間或平末端分子間的連接，也能修復(fù)雙鏈DNA或DNA-RNA雜交雙鏈上的單鏈DNA切口，廣泛用于NGS測序，分子克隆等應(yīng)用。
圖1.T4 DNA Ligase反應(yīng)原理圖
多年來，翌圣生物始終致力于生命科學(xué)試劑的研發(fā)與創(chuàng)新，特別是在分子酶領(lǐng)域，憑借深厚的專業(yè)積淀和技術(shù)實力，在該領(lǐng)域取得了顯著成績，為廣大的生命科學(xué)研究者提供了可靠且高效的分子酶產(chǎn)品。依托翌圣鎂孚泰生物ZymeEditor™酶改造平臺（了解更多）定向篩選出一系列性能卓越的分子酶原料，提供耐高溫、高靈敏、缺失腺化功能等多個方向的T4 DNA 連接酶產(chǎn)品，面向科研、診斷等多個應(yīng)用場景，打造全網(wǎng)最全面的T4 DNA連接酶系列產(chǎn)品供應(yīng)商。
表1.翌圣T4 DNA Ligase系列產(chǎn)品
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產(chǎn)品特性 |
產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
主要應(yīng)用 |
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耐高溫、低自連 |
Hieff® Versatile T4 DNA Ligase (600 U/μL) |
12996ES |
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兼容多樣本、 超低殘留 |
10299ES |
特別適合病原檢測，NIPT檢測等。 |
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超高靈敏度 |
10298ES |
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超低接頭自連 |
14960ES |
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常規(guī)款 |
10301ES |
分子克隆；NGS建庫接頭連接 |
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10300ES |
分子克隆；線性DNA的自環(huán)化 |
T4 DNA Ligase 產(chǎn)品介紹01
Hieff® Versatile T4 DNA Ligase (600 U/μL) （Cat#12996ES）
依托翌圣鎂孚泰生物的ZymeEditor™酶改造平臺對野生型T4 DNA連接酶進行改造，得到一種在連接效率、接頭自連以及熱穩(wěn)定性上均遠優(yōu)于傳統(tǒng)野生型T4 DNA Ligase，可催化黏性末端或平末端分子間的連接反應(yīng)，應(yīng)用于NGS建庫中的DNA片段與接頭連接。該產(chǎn)品已經(jīng)通過高通量測序驗證，質(zhì)量優(yōu)異，貨架期更持久！
數(shù)據(jù)展示
圖2.42℃熱穩(wěn)定性測試
將翌圣生物的Hieff® Versatile T4 DNA Ligase與品牌N*、品牌A* 、品牌T*以及品牌Q*的T4 DNA連接酶進行42℃下0、2 、4 h的熱處理。接著，使用翌圣生物DNA建庫試劑盒（Cat#12927ES）、投入1 µg斷裂的牛gDNA來構(gòu)建全基因組DNA庫。
結(jié)果表明：翌圣生物的Hieff® Versatile T4 DNA Ligase的熱穩(wěn)定性優(yōu)于品牌N*、品牌A* 、品牌T*、品牌Q*。
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02
Hieff® Versatile T4 DNA Ligase (600 U/μL) （Cat#12996ES）
翌圣針對NGS建庫過程中DNA片段和接頭連接專門開發(fā)了Fast T4 DNA連接酶，該酶具有高效的連接能力，不僅連接速度快，而且兼容各類樣本，對于復(fù)雜結(jié)構(gòu)核酸片段的連接更顯優(yōu)勢。目前已經(jīng)過大量客戶的高通量測序驗證，對于華大平臺的Bubble接頭的連接，也能得到穩(wěn)定的測序質(zhì)量。
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表2.不同種類樣本文庫產(chǎn)量
使用腸道微生物、cfDNA和FFPE HD200 gDNA三種樣本構(gòu)建NGS文庫，以此檢驗翌圣Fast T4 DNA Ligase與品牌N*的建庫能力。
結(jié)果表明：翌圣生物的Fast T4 DNA Ligase在不同樣本類型的文庫構(gòu)建中均展現(xiàn)出了更高的效率和產(chǎn)量。
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03
Novel T4 DNA Ligase (400 U/µL)（Cat#10298ES）
依托翌圣鎂孚泰生物的ZymeEditor™酶改造平臺對野生型T4 DNA連接酶進行改造，將T4 DNA Ligase的有效催化活性結(jié)構(gòu)域通過多輪突變篩選，得到一種連接活性更強的突變體。采用高純度的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)和嚴(yán)格的質(zhì)量檢測，有效去除核酸酶、切口酶的殘留，連接時間只需15min，成功打造一款快速高效的DNA連接酶—Novel T4 DNA Ligase (400 U/µL)（Cat#10298ES）。
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圖3.雙端均連接接頭檢測
使用翌圣生物和競品的Novel T4 DNA Ligase進行 cfDNA樣本的NGS文庫構(gòu)建測試（連接Y型建庫接頭），通過Agilent 2100檢測雙端均連接接頭的片段比例。
結(jié)果表明：翌圣生物的Fast T4 DNA Ligase具有極高的連接活性，完美適配cfDNA樣本。
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04
Hieff® 5'App T4 DNA Ligase (2000 U/µL)（Cat#14960ES）
依托翌圣鎂孚泰ZymeEditor™酶改造平臺，對野生型T4 DNA Ligase進行定向改造獲得Hieff® 5' App T4 DNA Ligase，該產(chǎn)品只能以預(yù)苷化接頭為底物進行接頭連接，能顯著減少片段自連，提高文庫轉(zhuǎn)化率。
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圖4.連接效率檢測圖
以100ng 170bp和300bp的模式片段為底物，使用翌圣Hieff® 5' App T4 DNA Ligase對合成的預(yù)腺苷化（App）接頭進行接頭連接，結(jié)果顯示連接效率達95%以上，且片段自連占比極低。
結(jié)果表明：翌圣生物的Hieff® 5'App T4 DNA Ligase具有極高的連接效率和極低的自連。
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