在購買細胞的時候,很多細胞都會寫著P3,特別是原代細胞,往往給很多客戶造成誤解? 你怎么可以發給我P3代的原代,很多人都會去問,為什么不發P0代?
我們來看看細胞是怎么標記代次的:
如果把從組織中提取出來的貼壁細胞稱之為P0代,那么第一次進行酶消化后的細胞就是P1代,為什么進行酶消化 ,因為P0代的細胞通常純度不高,所以要爭取更大的密度去進行磁珠篩選,我們一般會在P1代傳代時進行磁珠篩選,篩選后的細胞長滿后,進行穩定擴增一代,這時候已經時P2代 ,穩定擴增的這一代細胞就可以凍存保種了,這就是P3代的由來,實際是P2代凍存,所以它解凍復蘇時仍是凍存管標記的P3代。
就比如你有一個工作細胞系 第1代(P1),然后用胰蛋白酶消化并冷凍這些細胞,然后把小瓶標記為 P2解凍后,它們仍然 P2 直到你再次對它們進行傳代,此時它們就變成了 P3。
為什么大部分原代細胞說明的是倍增次數(PD)而不是傳代次數?
(1)研究員 A 使用 10:1 的比例分割 P6 的培養物。
(2)研究員 B 在 P6 時以 1:10 的比例分割相同的培養物。
(3)兩人都將下一個燒瓶標記為 P7。
然而,1:10 分裂的細胞必須增殖更多才能達到匯合,這意味著它們會經歷的細胞倍增次數(PD)更多。 隨著時間的推移,即使傳代次數相同,也會導致細胞在基因和功能上有所不同。
因此細胞的鋪板和凍存密度一定要注意!
比如內皮和神經元細胞,需要細胞與細胞能互相接觸才能自身產生細胞生長因子,細胞生長的更快而且形態也規整,而成纖維細胞 ,偶爾稀疏點也能長起來,普遍的細胞鋪板標準,不能低于整體匯合度的30%,使用正確的培養基,在細胞沒有任何受損的情況下它們基本都能長起來。
那么什么是細胞匯合?
匯合度不是直接計數細胞,而是 表面覆蓋度的視覺評估. 例如,70%匯合的培養瓶有70%的表面積被貼壁細胞占據。
匯合度可以幫您確定:
(1)何時分裂或傳代細胞
(2)轉染或藥物治療的最佳時間
(3)培養物是否適合分化、重編程或收獲等下游應用
細胞過度匯合會帶來什么?
(1)營養耗竭和代謝壓力
(2)細胞進入生長平鼎期、造成細胞衰老或凋亡
(3)垂死細胞積累有毒的細胞碎片
(4)細胞擠壓造成的形態和基因表達改變
(5)更高污染的風險,特別是真菌或細菌
怎么更好的培養出讓你滿意的細胞,還有最重要的一點就是:不隨意更換細胞的培養方式 ,內皮的細胞采用內皮的培養基,成纖維的采用成纖維的培養基,這樣細胞從始到終表達的蛋白基本會保持一致。
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