小鼠肺微血管內(nèi)皮細胞構(gòu)成半選擇性屏障，該屏障對于肺氣體交換，調(diào)節(jié)液體和可溶物在血液與肺間質(zhì)之間的流動具有重要意義。它還具有代謝功能，可以執(zhí)行一定的非呼吸功能。在肺損傷中，肺微血管內(nèi)皮細胞是活性氧類的重要靶細胞之一。
在肺炎的發(fā)生過程中，神經(jīng)體液介質(zhì)和氧化劑作用于內(nèi)皮細胞，使得細胞間隙滲透性增加，蛋白質(zhì)由血液進入間質(zhì)。細胞間隙滲透性的增加導(dǎo)致低氧血癥，出現(xiàn)成人呼吸窘迫綜合征和非心源性肺水腫。
小鼠肺微血管內(nèi)皮細胞來源于實驗動物的正常肺組織，細胞為上皮樣，多角形細胞，貼壁培養(yǎng)，采用CD31免疫熒光染色鑒定為陽性，細胞純度高于90%，不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
1.試驗所需儀器設(shè)備及試劑
（1）儀器
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儀器名稱 |
規(guī)格型號 |
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生物安全柜 |
BSC-1500ⅡA2-X |
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CO2細胞培養(yǎng)箱 |
BC-J160S |
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熒光倒置顯微鏡 |
DS-Ri2 |
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高速冷凍離心機 |
Multifuge X1R |
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電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 |
DHG-9123A |
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電熱恒溫震蕩水槽 |
DK-2B |
（2）試劑耗材
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試劑名稱 |
規(guī)格/貨號 |
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T25細胞培養(yǎng)瓶 |
430639 |
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血球計數(shù)板 |
Neubauer improved |
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24孔板專用細胞爬片 |
YA0350 |
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細胞培養(yǎng)孔板 |
WHB-24 |
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胎牛血清 |
1414426 |
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內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基 |
Primed-icell-002 |
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0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA） |
1734858 |
2、小鼠肺微血管內(nèi)皮細胞的分離培養(yǎng)方法
1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，
2) 從胸部解剖乳鼠，取出雙肺置于預(yù)冷的PBS中，盡可能的除去結(jié)締組織等，
3) 取肺邊緣部分，剪碎，將組織塊移入T25培養(yǎng)瓶中，倒置于細胞培養(yǎng)箱中，
4) 2h后，培養(yǎng)瓶中注入2 mL內(nèi)皮培養(yǎng)基，小心將培養(yǎng)瓶正置于培養(yǎng)箱，確保組織塊不會飄起來，
5) 每3d換液2mL，待細胞從組織塊中爬出來后，隔2d換液，待細胞融合達到60-70%左右時，去除組織塊，將肺微血管內(nèi)皮細胞重新鋪瓶。
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