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都給整理啦,避免提取原代細胞容易踩的坑

作者:上海啟達生物科技有限公司 2024-05-24T00:00 (訪問量:44047)

原代細胞培養,看似一個簡單的問題,但實際真的經歷過百轉遷回的實驗摸索后才發現真的要總結一下原代培養的這些小竅門:

先看看啥是原代細胞吧

原代細胞是從活體組織(例如活檢材料)中直接獲取,并在體外培養的細胞。由于這些細胞經歷極少的群體倍增,因此比連續(腫瘤或人工永生化的)細胞系更能代表其來源組織的主要功能成分,使原代細胞成為體內狀態更具代表性的模型;

處理樣本容易踩的坑:

錯誤的方式:樣本解凍后直接開始提取細胞

答:很容易讓細胞污染,在凍存樣本之前無論經過什么樣的處理,在接收樣本開始處理時,我們都需要先用hanks液進行清洗1-2次,再用純雙抗浸泡或者吹打30秒-1分鐘,以完全排除污染。

切記切記要不然就會功虧一簣。

提取細胞時容易踩的坑

1. 消化液不對,常見的組織消化液有膠原酶1,膠原酶2,各大公司生產的各種特效的胰酶等等,不同的部位的組織使用對應的消化液,讓原代提取事半功倍;比如上皮細胞的提取通常用胰酶即可 ,處理好組織后,將組織浸泡在胰酶中,置于4°,第二天輕松得到上皮細胞。

 

提出來的細胞魚龍混雜;

本來要提取的是內皮細胞;

一頓神操作下來

放培養箱后第二天一瞅,

自己都呆了,

眼花繚亂都不足以形容自己提取的這盤細胞,

隨便數一下起碼4.5種

 

以下是一些原代的正常圖片,僅供參考,有其他形態對比需要后臺聯系我們哦:

        上皮細胞                   內皮細胞                成纖維細胞               平滑肌細胞

 

原代細胞去雜質需要掌握的方法:

1. 采用時差貼壁法:成纖維細胞1-2小時可以貼上,角化細胞4小時內,膠質細胞1小時左右全部貼壁,神經細胞6小時開始貼壁,一般8-10個小時貼壁完成,最長的細胞貼壁時間也在48小時內,要是超過48小時沒有貼壁,就狠心扔掉吧,那已經不是你的寶了

2. 采用專用培養基去細胞雜質:各種原代細胞都有其需要的生長因子,激素和受體,因此,各大商家經過對細胞長期的研究,都會有各種各樣的針對原代細胞培養采用的培養體系

品牌太多

選擇困難癥又要爆發啦

那么就選我們吧

啟達生物擁有32種原代細胞培養體系, 18種腫瘤原代細胞培養體系,16種類器官培養體系,這些都是以低血清和無血清方式供貨的哦

低血清和無血清培養體系首先有助力抑制雜細胞生長,提高目的細胞生長的速度,其次,啟達生物的基礎培養基中含有抵抗非目的細胞生長的小分子化合物,抑制雜細胞生長;再次,生長因子含有目的細胞生長所需蛋白,為目的細胞的生長保駕護航

3.磁珠篩選法:磁珠分離是一種快速,高效,清潔的過程,科學家用其取代過濾,離心和分離技術。 磁珠和磁微粒通過功能化的抗原,抗體,催化劑,蛋白或核酸發揮作用,對細胞,細菌,病毒和其他生物體發揮作用。 然后利用磁性分離器將這些成分從復雜的基質中分離出來。 結果就是從目標整體中濃縮富集出樣本,磁珠篩選的步驟公眾號之前發過,有需要的同學往回看哦

4.高速離心沉淀法去雜質,顧名思義使用重力離心,不同種類的細胞會聚集到一個層面,一般在提取血液細胞的時候用的最多

 

點個關注,細胞提取不迷路,下一節,我們將整理怎么避免原代細胞提取時污染!

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