細(xì)胞裂解液是以去污劑為基礎(chǔ)、針對(duì)細(xì)胞裂解應(yīng)用、成分優(yōu)化的緩沖液和試劑。對(duì)于不同細(xì)胞類型、蛋白定位、以及下游應(yīng)用，需要不同的細(xì)胞裂解液進(jìn)行有效的細(xì)胞裂解和蛋白提取。
去污劑主要類型及其作用
根據(jù)去污劑類型、蛋白定位、及目的蛋白性質(zhì)來(lái)確定細(xì)胞裂解液的種類。
去污劑主要類型及其作用
| 類型 | 帶電情況 | 作用 | 應(yīng)用 | 舉例 |
|---|---|---|---|---|
| 離子型 (變性去污劑) | 帶電荷的 陰離子性或陽(yáng)離子性的 | 破壞蛋白活性、功能及蛋白間相互作用力 | 總蛋白提取 SDS-PAGE | SDS ETMAB |
| 非離子型 (非變性去污劑) | 不帶電荷 | 較少破壞活性及功能，可維持蛋白間作用力 | 酶學(xué)檢測(cè) 免疫檢測(cè) | Triton X-100 Tween 20 NP-40 |
| 兩性離子型 | 具有正電荷和負(fù)電荷的基團(tuán) 但凈電荷為零 | 兼具離子型和非離子型去污劑的特點(diǎn)，能破壞蛋白質(zhì)間相互作用 | CHAPS CHAPSO |
根據(jù)蛋白定位不同推薦的裂解液種類
| 蛋白定位 | 全細(xì)胞 | 細(xì)胞質(zhì) （可溶性蛋白） | 細(xì)胞質(zhì) （細(xì)胞骨架等不溶性蛋白） | 細(xì)胞膜 | 細(xì)胞核 | 線粒體 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 裂解液種類 | NP-40或RIPA | Tris-HCl | Tris-Triton | NP-40或RIPA | RIPA | RIPA |
常用細(xì)胞裂解液
#RIPA緩沖液
最初以其開(kāi)發(fā)的測(cè)定方法(放射免疫沉淀測(cè)定法)來(lái)命名，是兩種離子去污劑和一種非離子去污劑的Tris緩沖液,也是哺乳動(dòng)物細(xì)胞或軟組織裂解和蛋白提取的常用選擇。
常用配方：
25 mM Tris-HCl, pH 7.6
150 mM NaCl
1% NP-40
1%去氧膽酸鈉
0.1%十二烷基硫酸鈉(SDS)
兼容應(yīng)用：
BCA及去污劑兼容型的Bradford試劑蛋白濃度測(cè)定、SDS-PAGE、蛋白質(zhì)免疫印跡、ELISA及純化等。
#IP緩沖液
是一種修飾型的RIPA緩沖液（不含SDS），可有效溶解細(xì)胞蛋白，但無(wú)法釋放基因組DNA或破壞蛋白復(fù)合物，可兼容下游的免疫沉淀或者親和吸附的應(yīng)用。
常用配方：
25 mM Tris-HCl, pH 7.4
150 mM NaCl
1% NP-40
1% mM EDTA
5% 甘油
兼容應(yīng)用：
BCA及去污劑兼容型Bradford試劑蛋白濃度測(cè)定、蛋白質(zhì)免疫印跡、ELISA、免疫沉淀及報(bào)告基因檢測(cè)。
#NP-40緩沖液
NP-40是一種非離子型聚氧乙烯表面活性劑，常作為細(xì)胞裂解緩沖液或其他用于提取和溶解蛋白質(zhì)的溶液的組分。
常用配方：
150mM NaCl
1.0% NP-40
50mM Tris-HCl，pH值8.0
兼容應(yīng)用：
BCA及去污劑兼容型Bradford試劑蛋白濃度測(cè)定、蛋白質(zhì)免疫印跡、ELISA、免疫沉淀。
#Tris-Triton緩沖液
非離子型表面活性劑，常用作細(xì)胞裂解緩沖液或其他用于提取和溶解蛋白質(zhì)的溶液。Trition X-100效果介于NP-40和SDS之間。
常用配方：
10mM 三羥甲基氨基甲烷(Tris)，pH值7.4
100mM NaCl
1mM EDTA
1mM EGTA
1% Triton X-100
10% 甘油
0.1% SDS
0.5% 去氧膽酸鈉
兼容應(yīng)用：
BCA及去污劑兼容型Bradford試劑蛋白濃度測(cè)定、蛋白質(zhì)免疫印跡、ELISA、免疫沉淀。
產(chǎn)品列表
| 產(chǎn)品號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | Cas | 包裝 |
|---|---|---|---|---|
| C111538 | 氯化鈉 | 用于細(xì)胞和昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng),≥99.5%(T) | 7647-14-5 | 500g,2.5kg |
| N105507 | NP-40 | ~10% in H2O | 9016-45-9 | 25ml,100ml, 500ml,5L |
| T109026 | Triton X-100 | 生化試劑級(jí) | 9002-93-1 | 100ml,500ml,1L,4L |
| T105291 | 三(羥甲基)氨基甲烷鹽酸鹽(Tris HCl) | 用于分子生物學(xué)和細(xì)胞培養(yǎng),≥99.0%(AT) | 1185-53-1 | 100g,500g |
| S104198 | 脫氧膽酸鈉 | 98% | 302-95-4 | 25g,100g, 250g,500g |
| S118591 | 十二烷基硫酸鈉(SDS) | 分子生物學(xué)級(jí),≥98.5% (GC) | 151-21-3 | 25g,100g, 500g |
| T110602 | 三(羥甲基)氨基甲烷(Tris） | 細(xì)胞培養(yǎng)級(jí),≥99.9%(T) | 77-86-1 | 5kg |
| E112489 | 乙二胺四乙酸(EDTA) | 99%,用于細(xì)胞培養(yǎng) | 60-00-4 | 100g,500g |
| E104434 | 3,6-二氧雜-1,8-辛二胺四乙酸（EGTA） | 用于分子生物學(xué),≥99.0% | 67-42-5 | 25g,100g, 500g |
| G118851 | 甘油 | 無(wú)菌,for molecular biology, ≥99% | 56-81-5 | 100ml |