生物素與親和素/鏈霉親和素的非共價(jià)結(jié)合是已知最強(qiáng)的分子相互作用之一，解離常數(shù)（Kd）在飛摩爾至低皮摩爾范圍[1]，親和力比抗原-抗體反應(yīng)高10-100萬倍[2]。其極慢的解離速率和超高親和力使其成為抗體藥物研發(fā)和蛋白質(zhì)研究的核心工具。然而，生物素標(biāo)記蛋白制備常面臨標(biāo)記不完全、批間差異大、穩(wěn)定性不足等挑戰(zhàn)，限制了其在高精度實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。
近岸蛋白提供160+款生物素標(biāo)記蛋白和抗體，覆蓋細(xì)胞治療、抗體藥物、疫苗等熱門靶點(diǎn)，采用人源細(xì)胞表達(dá)，經(jīng)HPLC驗(yàn)證純度，ELISA/BLI檢測活性，確保高批間一致性和優(yōu)異性能。我們提供Avi-Tag定點(diǎn)標(biāo)記和化學(xué)標(biāo)記兩種定制服務(wù)，滿足多樣化實(shí)驗(yàn)需求，助力加速藥物開發(fā)。
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高品質(zhì)產(chǎn)品：批間一致性高，活性經(jīng)SPR/BLI、ELISA驗(yàn)證，適用于蛋白質(zhì)純化、抗體篩選、蛋白互作研究等。
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定制化服務(wù)：Avi-Tag與化學(xué)標(biāo)記技術(shù)靈活選擇，支持個(gè)性化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。
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廣泛適用性：支持SPR、BLI、ELISA、親和層析、抗體篩選等實(shí)驗(yàn)，助力基礎(chǔ)研究與藥物開發(fā)。
核心應(yīng)用場景
1 蛋白質(zhì)互作研究
生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)在表面等離子共振（SPR）等技術(shù)中表現(xiàn)卓越。SPR芯片表面修飾鏈霉親和素，可牢固結(jié)合生物素標(biāo)記的目標(biāo)蛋白。分析物注入流動池后，若與目標(biāo)蛋白發(fā)生特異性結(jié)合，將引發(fā)共振信號變化，精準(zhǔn)分析親和力、結(jié)合動力學(xué)等，廣泛用于蛋白-蛋白、蛋白-小分子互作研究。
2 親和層析純化
生物素標(biāo)記蛋白通過與固定在層析柱上的鏈霉親和素/親和素特異性結(jié)合，實(shí)現(xiàn)高效純化。該方法選擇性強(qiáng)，顯著減少非特異性結(jié)合，純化效率高。洗脫條件靈活，可通過pH調(diào)節(jié)、競爭性配體（如游離生物素）或溫和條件釋放目標(biāo)蛋白，保護(hù)活性。
3 抗體篩選與表征
高靈敏度檢測：生物素標(biāo)記增強(qiáng)ELISA、Western Blotting、流式細(xì)胞術(shù)等信號放大。通過生物素標(biāo)記的二抗與鏈霉親和素偶聯(lián)的酶/熒光團(tuán)結(jié)合，低豐度抗原也能被精確檢測。
親和力與特異性評估：生物素化抗原固定于鏈霉親和素表面，與候選抗體孵育后，通過鏈霉親和素標(biāo)記的檢測系統(tǒng)快速篩選高親和力、高特異性抗體，優(yōu)化候選分子。
Avi-Tag生物素標(biāo)記
Avi-Tag是一個(gè)由15個(gè)氨基酸殘基組成的短肽標(biāo)簽，通常鏈接至蛋白的N-或C-末端，對蛋白活性影響很小。Avi-Tag在體內(nèi)或體外都能被生物素連接酶（BirA）在賴氨酸殘基連接上一個(gè)生物素，從而實(shí)現(xiàn)蛋白的生物素化。
BirA酶催化AviTag生物素化示意圖
化學(xué)標(biāo)記法
化學(xué)標(biāo)記法是將蛋白N-末端游離胺基及內(nèi)部的賴氨酸側(cè)鏈上的胺基與生物素分子結(jié)合，通常一個(gè)蛋白質(zhì)分子會被標(biāo)記上多個(gè)生物素分子。化學(xué)標(biāo)記法具有靈敏度高、tag free等特點(diǎn)，是常用的生物學(xué)方法之一。
帶NHS基團(tuán)的生物素可與目標(biāo)分子（蛋白質(zhì)）上的胺基反應(yīng)
不同生物素標(biāo)記蛋白優(yōu)缺點(diǎn)
| 對比 | Avi-Tag生物素標(biāo)記 | 化學(xué)標(biāo)記法 |
| 是否需要tag | 是 | 否 |
| 是否定點(diǎn) | 定點(diǎn) | 非定點(diǎn)，隨機(jī) |
| 標(biāo)記均一性 | 均一 | 可能不均一，易過度生物素化 |
| 時(shí)間周期 | 與蛋白一起構(gòu)建，然后表達(dá)純化等，預(yù)計(jì)4周時(shí)間 | 在有蛋白/抗體的前提下，預(yù)計(jì)1周時(shí)間 |
部分?jǐn)?shù)據(jù)展示
生物活性經(jīng)ELISA抗體結(jié)合驗(yàn)證
Immobilized Biotinylated Human PD-1 (C-6His-Avi) (Cat#CY18) at 2 μg/ml (100 μl/well) can bind Anti-Human PD-1 mAb. The ED50 of Human Anti-Human PD-1 mAb is 8.83 ng/ml.
生物活性經(jīng)BLI抗體親和力驗(yàn)證
Loaded Anti-Human PD-1 mAb-Fc on Protein A Biosensor, can bind Biotinylated Human PD-1 (C-6His-Avi) (Cat#CY18) with an affinity constant of 1.54 nM as determined in BLI assay.
Immobilized Recombinant Human CALCRL&RAMP1 Heterodimer Protein (C-Fc) (Cat#C39Y) at 2 μg/ml (100 μl/well) can bind Human CGRP Antibody (Erenumab, Research Grade) (Cat#NC318): Biotinylated by NHS-biotin prior to testing. The ED50 of Human CGRP Antibody (Erenumab, Research Grade) (Cat#NC318) is 16.13 ng/ml.
Immobilized Human C5AR1 Antibody (Avdoralimab, Research Grade) (Cat#NC348) at 10 μg/ml (100 μl/well) can bind Recombinant Human C5AR1 N-ECD (C-Fc) (Cat#C45Y): Biotinylated by NHS-biotin prior to testing. The ED50 of Recombinant Human C5AR1 N-ECD (C-Fc) (Cat#C45Y) is 2.623 ug/ml.
部分生物素化靶點(diǎn)
| PD-1 | HER2 | TSLP | EGFR |
| PD-L1 | Trop-2 | VEGFR | EpCAM |
| CTLA-4 | CLDN 18.2 | IgG1 Fc | CD30 |
| LAG-3 | MSLN | PCSK9 | PD-L2 |
| TIGIT | GPC3 | CXADR | FcRn |
| TIM-3 | Nectin-4 | LDL R | CD52 |
| CD47 | CD20 | DR5 | CA125 |
| B7-H3 | BCMA | CD36 | TGF-beta 3 |
| OX40 | CD79B | P-selectin | TGF-beta 1 |
| 4-1BB | CD22 | IL-3R | LRRC15 |
參考文獻(xiàn)
[1]Dechancie J , Houk K N .The origins of femtomolar protein-ligand binding: hydrogen-bond cooperativity and desolvation energetics in the biotin-(strept)avidin binding site.[J].Journal of the American Chemical Society, 2007, 129(17):5419.DOI:10.1021/ja066950n.
[2]Vito A D , Reitano E , Poggi L ,et al.Biotin oligonucleotide labeling reactions: A method to assess their effectiveness and reproducibility[J].Analytical Biochemistry, 593[2025-06-05].DOI:10.1016/j.ab.2020.113590.