RAW264.7細(xì)胞，也被稱為小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞，常被用作研究巨噬細(xì)胞功能和生物學(xué)特性的模型，細(xì)胞可表現(xiàn)出與原發(fā)性巨噬細(xì)胞相似的功能。因此，RAW264.7細(xì)胞在多個研究領(lǐng)域中都有廣泛的應(yīng)用：
Raw264.7細(xì)胞20X展示圖（啟達(dá)生物:CD0168）
1. **骨骼疾病研究**：RAW264.7細(xì)胞在體外可以對刺激產(chǎn)生反應(yīng)，并隨后產(chǎn)生具有破骨細(xì)胞完全分化的特征的多核細(xì)胞。因此，它被廣泛用于研究骨骼疾病，如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、骨質(zhì)溶解、牙周炎等。RAW264.7已被證明在RANKL誘導(dǎo)下容易分化為破骨細(xì)胞，使其成為破骨細(xì)胞生成研究的常用體外模型。
2. **炎癥研究**：RAW264.7細(xì)胞也是篩選抗炎活性物和研究炎癥最常用的體外研究模型。在誘導(dǎo)劑（如脂多糖LPS）的作用下，RAW264.7細(xì)胞會模擬炎癥反應(yīng)，釋放或上調(diào)多種炎癥介質(zhì)，如一氧化氮（NO）、環(huán)氧合酶-2（COX-2）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素6（IL-6）等。這使得RAW264.7細(xì)胞成為研究炎癥過程和開發(fā)抗炎藥物的寶貴工具。
3. **免疫學(xué)研究**：RAW264.7細(xì)胞還可以用于研究各種刺激物（如細(xì)菌、病毒、寄生蟲、細(xì)胞因子等）對巨噬細(xì)胞的影響，以及巨噬細(xì)胞在免疫反應(yīng)中的作用。
4. **藥物篩選和毒理學(xué)研究**：RAW264.7細(xì)胞也被廣泛用于藥物篩選和毒理學(xué)研究，以評估藥物對巨噬細(xì)胞功能和生存能力的影響。
Raw264.7如何誘導(dǎo)成破骨細(xì)胞呢？
重點(diǎn)來了， 不要瞌睡哦
破骨細(xì)胞誘導(dǎo)和檢測步驟
1. RAW264.7 細(xì)胞培養(yǎng)與接種的密度和梯度稀密會導(dǎo)致RAW264.7細(xì)胞生長迅速且容易分化，而狀態(tài)較好的RAW264.7細(xì)胞是誘導(dǎo)破骨細(xì)胞的關(guān)鍵。
,細(xì)胞復(fù)蘇后直到密度到90%以上并且換液后第二天發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基泛黃，立即終止細(xì)胞培養(yǎng)并開始傳代，使用瓶內(nèi)發(fā)黃的培養(yǎng)基先輕輕吹打細(xì)胞，之后再用PBS吹打一次即可完全收集細(xì)胞，若瓶內(nèi)還貼有不是橢圓形的細(xì)胞，一般棄之不用，因?yàn)檫@些raw264.7已經(jīng)分化，不適合破骨誘導(dǎo)了。
2. RAW 264.7細(xì)胞生長較快，且誘導(dǎo)需要4天,誘導(dǎo)前密度梯度培養(yǎng)4天,將RAW264.7細(xì)胞按(0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50)x10 ^4/cm²”的密度接種到24孔板中，培養(yǎng)4天后用1%的甲苯胺藍(lán)染色觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，找出RAW264.7細(xì)胞的最佳誘導(dǎo)密度。
3-1： TRAP 染色:根據(jù)密度梯度培養(yǎng)結(jié)果將RAW264.7細(xì)胞以5x10^3/cm²的密度接種到48孔板中,用50ng/ml的高濃度RANKL誘導(dǎo)破骨細(xì)胞，并于24、48、72、96小時分別進(jìn)行TRAP染色，觀察破骨細(xì)胞形態(tài)變化。同樣密度將RAW264.7細(xì)胞接種到48孔板中，設(shè)置對照組與不同RANKL濃度誘導(dǎo)組，過夜貼壁后，對照組正常培養(yǎng)，未加任何處理，誘導(dǎo)組分別加用5、10、20、50ng/mI的RANKL誘導(dǎo)破骨細(xì)胞，每2天換液。4天后鏡下觀察到融合的破骨細(xì)胞取出48孔板，去除培養(yǎng)液，進(jìn)行 TRAP 染色；
Raw264.7TRAP 染色，分別是4X,10X,100X拍攝
3-2:破骨細(xì)胞吸收功能檢測實(shí)驗(yàn) RAW264.7細(xì)胞以5x10^3/cm²的密度接種于24孔骨細(xì)胞培養(yǎng)板中，設(shè)立對照組與誘導(dǎo)組，對照組正常培養(yǎng)，未加任何處理，誘導(dǎo)組加20ng/ml的RANKL誘導(dǎo)破骨細(xì)胞，換液2天/次，誘導(dǎo)4天后拿出骨細(xì)胞培養(yǎng)板，移除培養(yǎng)液，dd水洗第1遍，加人4%的次氯酸鈉漂洗5min,移除次氯酸鈉，用dd水沖洗第2遍，加人1%的甲苯胺藍(lán)染色10min后，dd水洗第3遍，室溫晾干，光鏡下進(jìn)行觀察拍照。
RAW264.7誘導(dǎo)成破骨細(xì)胞的甲苯胺藍(lán)染色
3-3：骨吸收實(shí)驗(yàn)：RAW264.7細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)4天后骨細(xì)胞培養(yǎng)板上出現(xiàn)大量的圓形、橢圓形、不規(guī)則形狀的白色吸收瘢痕，對照組未見吸收瘢痕
對照組 誘導(dǎo)組
Raw264.7細(xì)胞炎癥模型構(gòu)建
構(gòu)建炎癥模型對RAW264.7細(xì)胞的形態(tài)沒有要求，終于不用在乎細(xì)胞是否長角了
1.細(xì)胞鋪板:以96孔板為例，選擇生長狀況良好的小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7消化，離心后重懸計(jì)數(shù)，選擇合適的細(xì)胞濃度稀釋(2~3x10^4/孔)
2、鋪板:將重懸好的細(xì)胞液倒入加樣槽中，吹打細(xì)胞，混勻加樣，每孔加入100 ul，2~3列加樣后重新吹打均勻(細(xì)胞易沉降)，邊緣孔每孔加入100ulPBS.
3、放入細(xì)胞培養(yǎng)箱，5 % CO2、37'C條件下繼續(xù)培養(yǎng)過夜
4、配藥:樣品A，配制10 mg/mL溶于1 mL無菌水;樣品：B.C，配制10mg/mL溶于1ml DMSO，分別用高糖DMEM(含10%FBS)稀釋成不同濃度(0.2、0.5、5.0、1.0和10ug/mL)
5、將96孔板過夜培養(yǎng)后將完全培養(yǎng)液倒出，按設(shè)置的濃度梯度加藥，每個濃度設(shè)置3個重復(fù)樣，培養(yǎng) 24 h。
6、將已加藥培養(yǎng)過夜(加藥時細(xì)胞接近平鋪滿孔底)的 96 孔板中培養(yǎng)基吸出，每個孔中加入50 μL亞甲基藍(lán)染液。
7、放入細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育 1小時后取出，洗去亞甲基藍(lán)染色液。
8、測 OD 值:每孔加100ul洗脫液，培養(yǎng)液震蕩15 min，放入酶標(biāo)儀，繼續(xù).蕩3 min后595 nm 波長讀數(shù)。
9分析數(shù)據(jù)，需要先得出對照組的平均值，各個實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)/對照平均值x100%得出細(xì)胞存活率，算出各個數(shù)值之間的偏差，分析。
不同質(zhì)量濃度脂多糖對RAW264.7細(xì)胞活力的影響
文末彩蛋，即日起到7月底 20株細(xì)胞618元促銷：
