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CD分子，即白細胞分化抗原，也稱分化簇（Cluster of Differentiation），廣泛分布于各種免疫細胞表面，如B細胞、T細胞、樹突狀細胞和NK細胞等，是不同譜系的白細胞在正常分化成熟的不同階段及活化過程中，出現或消失的細胞表面標記。監測不同CD抗原的表達譜使得基于細胞在不同免疫過程中的功能的細胞類型鑒定、分離和表型分型成為可能。

表1.免疫分型的重要CD標志物

常見CD分子生物學功能

CD3

是一種20-26 kDa的分子，表達于所有成熟的T淋巴細胞（約占正常人外周血淋巴細胞的60-80%）、NK-T細胞和一些胸腺細胞。CD3與T細胞受體α/β或γ/δ二聚體相關聯，還在抗原識別過程中參與T細胞的激活和信號轉導。CD3單抗被用于測定血液中成熟T細胞。

CD4

也稱為T4，是一種55kD的單鏈跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族。CD4存在于大多數胸腺細胞、T細胞的一個亞群、也低水平表達于單核/巨噬細胞。CD4是免疫應答中的共受體（通過與MHC II類分子結合發揮協同受體活性），同時也是HIV感染的主要受體（CD4是HIV-1表面糖蛋白gp120的主要受體）。CD4調節T細胞的活化、參與T/B細胞的粘附、T細胞的分化、T細胞選擇和信號轉導。

CD8a

是一種32-34kD的I型糖蛋白。它與CD8b形成同源二聚體（CD8a/a）或異源二聚體（CD8a/b）。CD8，也稱為T8和Leu2，是免疫球蛋白超家族的成員，存在于大多數胸腺細胞、外周血T細胞的一個亞群以及NK細胞上（幾乎完全表達CD8a同源二聚體）。CD8作為MHC I的共受體在抗原識別和T細胞活化中發揮作用，并在胸腺分化中扮演了重要角色。CD8a中的兩個結構域對其功能非常重要：胞外結合MHC Iα3的IgSF結構域和胞內酪氨酸激酶p56 Lck的CXCP結構域。

CD28

是一種44 kD的二硫鍵連接的同源二聚體型I糖蛋白。它是免疫球蛋白超家族的成員，也被稱為T44或Tp44。CD28 在大多數T系細胞、NK細胞亞群和漿細胞上表達。CD28采用CDR3樣環中高度保守的MYPPY結構同時結合CD80 和CD86。CD28被認為是一個主要的共刺激分子，誘導T淋巴細胞的激活和IL-2合成，并防止細胞死亡。體外研究表明，CD28為抗原呈遞細胞的CD80和CD86上的配位提供了T細胞激活和增殖所需的共刺激信號。

CD19

是一種 95 kD 的 I 型跨膜糖蛋白，也被稱為 B4。它是免疫球蛋白超家族的成員，在 B 細胞（從前 B 細胞到成熟 B 細胞，但在漿細胞上不存在）和濾泡樹突狀細胞上表達。CD19 參與 B 細胞的發育、激活和分化。CD19 與 CD21（CR2）和 CD81（TAPA-1）形成復合物，并作為 BCR 共受體發揮作用。

CD20

是一種 33-37 kD 的膜蛋白，有四個跨膜區段，也被稱為 B1 和 Bp35。CD20 在前 B 細胞、靜止和活化的 B 細胞（不包括漿細胞）、一些濾泡樹突狀細胞以及 T 細胞亞群中低水平表達。CD20 在活化的 B 細胞和惡性 B 細胞中被大量磷酸化。CD20 的同源寡聚體復合物被認為形成 B 細胞質膜的 Ca2+導電離子通道。CD20 分子參與 B 細胞的激活，并與各種 Src 家族激酶（Lyn、Lck、Fyn）相關。它與 MHC I 和 II 類、CD53、CD81 和 CD82 形成復合物。 

CD抗原在免疫分型中被廣泛用作細胞標志物，可用于識別特定白細胞群和淋巴細胞亞群的存在和比例，并對其進行分離。流式細胞術和免疫組織化學（IHC）是檢測和分析這些CD標志物的常用檢測方法。

流式抗體選擇注意事項

 01

抗體的基礎信息

待測靶標表達位置：胞膜表達或胞內表達，靶標表達位置不同，染色方式也不同

抗體反應性需與樣品來源一致；

選擇明確標注可用于流式實驗的抗體；

02

確定流式細胞儀的參數

激光器：提前了解使用的流式細胞儀的激光器配置，常見的有紫色激光(405nm)、藍色激光(488nm)、紅色激光(635nm)等；

濾光片：檢測通道的多少，決定最多可以同時檢測幾個指標。熒光素的發射波長與濾光片有關，所選擇熒光素要在儀器的可檢測范圍內。

03

熒光素的選擇

抗原表達弱或分群不明顯，選擇強熒光，如PE、APC；

抗原表達強或分群明顯，選擇弱熒光，如FITC；

常用熒光強弱排序：PE-Cy5＞PE＞AF647＞APC＞PerCP＞Cy5.5＞FITC。

04

同型對照抗體的選擇

選擇與一抗相同種屬來源，相同免疫球蛋白亞型，相同熒光染料標記的同型對照抗體。如32102ES-FITC Mouse Anti-Human CD3 mAb(IgG2a), 同型對照選擇FITC Mouse IgG2a。

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