肝內膽管癌(ICC)是第二大常見的原發性肝癌，并且發病率仍在持續的升高。臨床診斷發現在大多數肝內膽管癌患者都存在多處腫瘤遠端轉移，目前吉西他濱聯合順鉑的化療治療方案是治療肝內膽管癌唯一最佳選擇，但患者的生存率仍然不高，并且伴有嚴重的并發癥。
隨著靶向治療與免疫治療的到來，相關的臨床研究實驗也相繼展開，一些靶向藥物以及免疫檢查點抑制劑也被用于治療當中，然而其反應率卻低于20%。究其原因，腫瘤的高度異質性可能是目前免疫治療需要攻克的難點，因此，了解腫瘤內和腫瘤多病灶間的異質性微環境將有助于指導個性化治療決策。
近日，來自中山大學附屬第一醫院彭穗教授團隊在Clinical Cancer Research期刊（IF=12.531）發表研究論文。文中收集16位肝內膽管患者的66個腫瘤樣本，從基因組，轉錄組，表觀基因組以及免疫微環境等多組學維度分析腫瘤內與腫瘤間的異質性，全方面的解析腫瘤異質性產生，并提出一種與預后和治療方案相關聯的免疫分類系統，為肝內膽管癌未來的治療提供了更精準的靶向。
文中首先對腫瘤樣本和非腫瘤肝組織進行全外顯子測序，發現每個患者中的所有腫瘤都有一些共同的突變，系統樹，最大似然，鄰接，最大簡約法（系統發生學分析）結果表明都這些腫瘤都有相同的來源。
2
根據inter-tumor
heterogeneity（ITH）指數，作者將多灶性ICC患者分為高ITH與低ITH兩組，分別在基因組水平，轉錄組水平以及表觀基因組水平上分析患者腫瘤內和腫瘤間的異質性。
通過比較肝細胞癌（HCC）與兩組之間制藥靶點的突變，拷貝數改變的差異，得出具有不同的ITH可能會對相應的靶向藥物產生不同的反應。轉錄和表觀基因水平上，高ITH組與低ITH組在RNA表達，信號通路激活，甲基化和去甲基化位點都表現出明顯差異。
3
文中利用全轉錄組測序，單細胞測序以及多光譜成像技術對多灶點ICC患者的腫瘤免疫微環境異質性進行分析。
之后對患者病理切片進行多色標記（CD4,
CD8, CD68, CD20, PD-1 和CK19），利用TissueGnostics公司TissueFAXS Spectral多光譜成像系統進行全光譜成像，通過建立光譜庫與光譜拆分技術，獲得準確的多通道信號圖像。同時，文中也采用TG公司強大的StrataQuest 分析系統對多色樣本進行了數據挖掘。結果顯示除了CD20+B細胞，在同一病人的多個腫瘤中CD4+,CD8+ T細胞以及CD68+巨噬細胞的密度是相似的。為了進一步驗證這一結果，作者進行了單細胞測序，其結果與全轉錄組結果是相吻合的。此外，還發現ICC患者中不同腫瘤對抗PD1免疫治療的反應性也是相差無幾的。
4
根據以上數據結果，作者推測患者中不同腫瘤之間可能是一個相同的免疫表型分類。因此，作者依據已報道的免疫標志物將所有腫瘤樣本分為高免疫組與低免疫組兩組。同樣，利用TG公司StrataQuest 分析系統對多色樣本進行分析，得出高免疫組中CD4+,CD8+ T細胞和CD20+B細胞密度顯著升高。同時，文中還分析了腫瘤細胞（CK19+）與不同免疫細胞之間的距離，以及腫瘤細胞周圍25um范圍之內的CD8+ T細胞密度，結果顯示高免疫組腫瘤細胞與免疫細胞距離較近，CD8+
T細胞密度較大，并且高免疫組CD8+ T細胞的空間分布呈現一種集群分布，而低免疫組呈分散狀。
最后，作者發現這種免疫表型分類可能是DNA表觀修飾引起的，它是與患者生存相關的。總的來說，這些結果表明這種免疫分型方法可靠，可用于患者分級，也可能與ICC免疫治療的療效有關，對患者預后和治療方案評估具有重要意義。與此同時，這可能也需要在未來更大的群體中去得以進一步證實。