翌圣ZymeEditor?精品盤點(diǎn)之脫氧核糖核酸酶I（DNase I）

脫氧核糖核酸酶I（Deoxyribonuclease I, DNase I），是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA的非特異性核酸內(nèi)切酶。它能夠水解磷酸二酯鍵，產(chǎn)生含有5'-磷酸基團(tuán)和3'-OH基團(tuán)的單脫氧核苷酸和寡脫氧核苷酸。

DNase I最佳的工作pH范圍是7-8，其活性依賴于Ca2+，并可被二價(jià)金屬離子如Mn2+，Mg2+，Zn2+等激活。在Mg2+存在條件下，DNase I 隨機(jī)剪切雙鏈DNA的任意位點(diǎn)；Mn2+存在條件下，DNase I可在同一位點(diǎn)剪切DNA雙鏈，形成平末端，或1-2個(gè)核苷酸突出的粘末端。

圖1. DNase I在Mg2+以及Mn2+存在下可切割dsDNA原理圖

翌圣DNase?I由ZymeEditor?酶改造平臺重組表達(dá)而來，無RNase殘留，酶切效率高，作用底物類型廣，可應(yīng)用于體外轉(zhuǎn)錄去除模板DNA、RNA建庫中去除rRNA、RNA提取或反轉(zhuǎn)錄前去除gDNA等多個(gè)場景。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1、高酶切效率：37℃孵育可快速高效降解DNA；

2、無RNase殘留；

3、特異性強(qiáng)：特異性去除DNA，對RNA無影響；

4、底物多樣性：可作用于單鏈DNA、雙鏈DNA、染色質(zhì)及DNA-RNA雜交鏈。

性能展示

1、無RNase殘留

將DNase I與底物RNA孵育，瓊脂糖凝膠電泳比較RNA譜帶變化。結(jié)果顯示翌圣DNase I無RNase殘留。

圖2. RNase殘留檢測?C：對照

2、高效去除模板DNA

分別使用翌圣及進(jìn)口品牌T*、N*的DNase I進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄中DNA模板去除，結(jié)果顯示翌圣DNase I的模板DNA去除效率與國際進(jìn)口品牌相當(dāng)。

圖3. 體外轉(zhuǎn)錄中模板DNA去除 C：不加DNase I對照；T*：進(jìn)口品牌T*；N*：進(jìn)口品牌N*；M：Marker

3、NGS建庫，產(chǎn)量與進(jìn)口品牌相當(dāng)

分別使用翌圣及進(jìn)口品牌T*的DNase I進(jìn)行rRNA去除，將純化后的RNA進(jìn)行建庫，結(jié)果顯示翌圣與進(jìn)口品牌的DNase I在進(jìn)行rRNA去除后，RNA建庫產(chǎn)量相當(dāng)。

圖4. DNase?I用于RNA建庫?T*：進(jìn)口品牌T*

翌圣DNase I?選擇指南

為滿足不同的應(yīng)用需求，翌圣可提供牛胰腺提取來源及大腸桿菌重組表達(dá)兩種來源的DNase I，并可提供GMP級別DNase I，以滿足mRNA體外轉(zhuǎn)錄等應(yīng)用。

產(chǎn)品來源

產(chǎn)品定位

應(yīng)用

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品貨號

牛胰腺提取

普通

主要用于從蛋白制備物中去除DNA

Deoxyribonuclease I (DNase I) from bovine pancreas

10607ES

10608ES

重組表達(dá)

RNase Free

適用于從RNA和蛋白制備物中去除DNA

Recombinant DNase I (RNase-free)

10325ES

重組表達(dá)

GMP級, RNase Free

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