疫球蛋白（IgG）上N-聚糖的唾為何唾液酸分析很重要？
唾液酸是在聚糖的非還原末端上發(fā)現(xiàn)的帶負(fù)電荷的單糖。它們對糖蛋白的穩(wěn)定性和3D構(gòu)象很重要，并且參與許多生物相互作用。唾液酸通常具有關(guān)鍵性的功能作用：例如，免疫球蛋白（IgG）上N-聚糖的唾液酸化可以增強(qiáng)抗炎活性；氧乙酰化的唾液酸可以更改配基的相互作用，并且影響降解（EPO上可以找到包括 Neu5,9Ac2在內(nèi)的氧乙酰化的唾液酸）；唾液酸的存在同時(shí)也通過防止位于肝細(xì)胞上的去唾液酸糖蛋白受體吸收，從而增加糖蛋白的血清半衰期。
在自然界中可以找到多種多樣的唾液酸，但在生物藥品中N-聚糖和O-聚糖上發(fā)現(xiàn)的兩種主要唾液酸是N-乙酰神經(jīng)氨酸（Neu5Ac或 NANA）和N-羥乙酰神經(jīng)氨酸（Neu5Gc 或 NAGA)。人體不能合成 Neu5Gc，并且含有 Neu5Gc 的藥物可能導(dǎo)致免疫反應(yīng)，如慢性炎癥。抗Neu5Gc的 抗體能在正常人的唾液中檢測到，可以中和任何含有Neu5Gc的生物制藥，從而降低藥物的y功效。重要的是要注意，細(xì)胞系的選擇可以極大地影響生物制藥中唾液酸的類型，例如小鼠IgG上的大部分唾液酸通常是Neu5Gc。
因此，為確保藥物的安全和效用，需要檢測產(chǎn)品生命周期所有階段的唾液酸水平和類型，以及批次間質(zhì)控的一致性。因此，唾液酸分析是ICH Q6B產(chǎn)品執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)中的一項(xiàng)監(jiān)管規(guī)定，針對對象為 生物藥物。
使用Ludger試劑盒和標(biāo)準(zhǔn)品可以獲取哪些信息？
•
唾液酸（Neu5Ac 和 Neu5Gc）按nmol/mg 蛋白的定量
•
氧乙酰化的Neu5,9Ac2的相對定量
如何使用Ludger試劑盒和標(biāo)準(zhǔn)品來進(jìn)行唾液酸的定量分析：
唾液酸釋放
唾液酸是由糖蛋白樣品溫和酸解后釋放；樣品通常是一式三份的50μg，盡管唾液酸化水平很低的樣品可能需要更大量，例如 單克隆抗體（MAbs）。我們推薦在整個(gè)過程中使用大量對照品進(jìn)行過程控制：樣品緩沖液或水作為陰性對照；胎球糖蛋白（GCP-FET-50U）和/或定量的糖肽（BQ-GPEP-A2G2S2-10U）作為陽性對照。樣品和過程對照品用2M 乙酸溶液培養(yǎng)2小時(shí)，溫度控制在80°C。
DMB 標(biāo)記
接著用1,2-二氨基-4,5-亞甲氧基苯二鹽酸鹽熒光標(biāo)記釋放的唾液酸，以確保探測敏感。2 HCl（DMB）-請參見圖 1。當(dāng)唾液酸環(huán)打時(shí)，它會暴露羧酸旁邊的酮組，DMB連接這兩個(gè)相鄰的酮組，生成熒光（其他單糖沒有這些相鄰的酮組，因此沒有被熒光標(biāo)記）。酸水解樣品和過程對照品以及 Ludger唾液酸標(biāo)準(zhǔn)品：Neu5Ac (CM-NEUAC-01), Neu5Gc (CM-NEUGC-01), 唾液酸參照品 (CM-SRP-01)，以及Neu5,9Ac2 (CM-NEU5,9,AC2-01)如果使用的話，放置在50°C下，DMB標(biāo)記培養(yǎng)3 小時(shí)。
LC 分析
Neu5Ac 和 Neu5Gc 標(biāo)準(zhǔn)品被稀釋，生成這兩種唾液酸定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。唾液酸參照品（CM-SRP-01）和 Neu5,9Ac2 被用于唾液酸鑒定。樣品和對照品的分析可使用HPLC LudgerSep-R1柱（LS-R1-4.6x150，見表 1）進(jìn)行高壓液相色譜分析，或者LudgerSep-uR2柱（LS-UR2-2.1x100，見表 2）進(jìn)行超高壓液相色譜分析），從而加快 運(yùn)行時(shí)間。圖 1（A和B）顯示的是典型的唾液酸參照品圖譜。
產(chǎn)品/訂購信息
唾液酸釋放和標(biāo)記
LT-KDMB-A1 LudgerTag DMB 唾液酸釋放和標(biāo)記試劑盒
陽性對照品
GCP-FET-50U-X4 胎球糖蛋白標(biāo)準(zhǔn)品
BQ-GPEP-A2G2S2-10U LudgerBioQuant GPEP A2G2S2 糖肽標(biāo)準(zhǔn)品
唾液酸標(biāo)準(zhǔn)品
CM-NEUAC-01 N-乙酰神經(jīng)氨酸 (Neu5Ac or NANA) 定量標(biāo)準(zhǔn)品
CM-NEUGC-01 N-羥乙酰神經(jīng)氨酸 (Neu5Gc or NGNA) 定量標(biāo)準(zhǔn)品
CM-NEU5,9,AC2-01 5-N-乙酰基-9-O-乙酰基神經(jīng)氨酸標(biāo)準(zhǔn)品 (Neu5,9Ac2)
CM-SRP-01 唾液酸參照品
LC 分析
LS-R1-4.6x150 LudgerSep R1 HPLC 色譜柱
LS-UR2-2.1x100 LudgerSep uR2 UHPLC 色譜柱
聯(lián)系方式：英國Ludger生物科技有限公司中國辦事處
電 話：186 0210 8329 & 157 1167 5909
QQ(Lily): 258 363 672 QQ(Cindy): 170 439 096
郵 箱：lily.wang@ludger.com & cindy.li@ludger.com
地 址：上海靜安區(qū)南京西路1266號
文章鏈接下載：https://www.ludgersh.com/page107.html?article_id=47
更多產(chǎn)品請?jiān)L問中文官網(wǎng)：https://www.ludgersh.com/ 國外官網(wǎng)： www.ludger.com
•
唾液酸（Neu5Ac 和 Neu5Gc）按nmol/mg 蛋白的定量
•
氧乙酰化的Neu5,9Ac2的相對定量使用Ludger試劑盒和標(biāo)準(zhǔn)品可以獲取哪些信息？
•
唾液酸（Neu5Ac 和 Neu5Gc）按nmol/mg 蛋白的定量
•
氧乙酰化的Neu5,9Ac2的相對定量，并且影響降解（EPO上可以找到包括 Neu5,9Ac2在內(nèi)的氧乙酰化的唾液酸）；唾液酸的存在同時(shí)也使用Ludger試劑盒和標(biāo)準(zhǔn)品可以獲取哪些信息？
•
唾液酸（Neu5Ac 和 Neu5Gc）按nmol/mg 蛋白的定量
•
氧乙酰化的Neu5,9Ac2的相對定量通過防止位于肝細(xì)胞上的去唾液酸糖蛋白受體吸收，從而增加糖蛋白的血清半衰期。
在自然界中可以找到多種多樣的唾液酸，但在生物藥品中N-聚糖和O-聚糖上發(fā)現(xiàn)的兩種主要唾液酸是N-乙酰神經(jīng)氨酸（Neu5Ac或 NANA）和N-羥乙酰神經(jīng)氨酸（Neu5Gc 或 NAGA)。人體不能合成 Neu5Gc，并且含有 Neu5Gc 的藥物可能導(dǎo)致免疫反應(yīng)，如慢性炎癥。抗Neu5Gc的 抗體能在正常人的唾液中檢測到，可以中和任何含有Neu5Gc的生物制藥，從而降低藥物的y功效。重要的是要注意，細(xì)胞系的選擇可以極大地影響生物制藥中唾液酸的類型，例如小鼠IgG上的大部分唾液酸通常是Neu5Gc。
因此，為確保藥物的安全和效用，需要檢測產(chǎn)品生命周期所有階段的唾液酸水平和類型，以及批次間質(zhì)控的一致性。因此，唾液酸分析是ICH Q6B產(chǎn)品執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)中的一項(xiàng)監(jiān)管規(guī)定，針對對象為 生物藥物。糖多糖分析服務(wù)/ Glycan Analysis Services:唾液酸定量分析/ Quantitative Sialic Acid Analysis 分析服務(wù)/ Glycan Analysis Services:唾液酸定量分析/ Quantitative Sialic Acid Analysis