G418，是一種與慶大霉素相關(guān)的氨基糖苷類抗生素，常用作真核細(xì)胞的篩選。作為硫酸新霉素的類似物，G418在真核細(xì)胞中干擾80S核糖體的功能以及蛋白質(zhì)的合成。
顯性作用的抗性基因(neor)的表達(dá)可篩選包含轉(zhuǎn)座子Tn601(903)或Tn5的哺乳動(dòng)物表達(dá)載體。當(dāng)表達(dá)抗性的哺乳動(dòng)物細(xì)胞在含有G418的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，約10-14天內(nèi)產(chǎn)生穩(wěn)定的菌落。
產(chǎn)品性質(zhì)
形態(tài)：白色粉末
融點(diǎn)：138～144℃
溶解性：溶于水、甲醇
CAS：108321-42-2
分子式 ： C20H40N4O10·2H2SO4
分子量 ：692.71
比旋： 104-121℃
水分： ≤10%
吸光值： ≤0.015 (280nm,1mg/ml), ≤0.1 (570nm, 100mg/ml)
儲(chǔ)運(yùn)：室溫下運(yùn)輸, 干粉在室溫下儲(chǔ)存，溶于水、甲醇，溶液于-20℃儲(chǔ)存。
質(zhì)量?jī)?yōu)勢(shì)
1、提供純度＞90%（HPLC）的產(chǎn)品，與其他低濃度G418產(chǎn)品相比，使用量更低，更有利于細(xì)胞生長(zhǎng)
2、效價(jià)＞700ug/mg
3、嚴(yán)格控制ED50值，保證各批次的一致性
使用方法
由于各真核細(xì)胞系對(duì)G418敏感度不同,需通過實(shí)驗(yàn)確認(rèn)各新細(xì)胞系或細(xì)胞株穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時(shí)殺死非穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞所需用量。
最適用量通過建立細(xì)胞死亡曲線獲得。將細(xì)胞稀釋至1000cell/ml，每孔100ul加入有培養(yǎng)基的24孔板，將每孔中的G418濃度稀釋至0,100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1100ug/ml等12個(gè)級(jí)別, 培養(yǎng)10-14天，以最低細(xì)胞全部死亡濃度為基準(zhǔn)，一般400-800ug/ml左右，篩選時(shí)比該濃度再高一個(gè)級(jí)別，維持時(shí)使用篩選濃度的一半即可。
濃度范圍參考
| 細(xì)胞系或機(jī)體 | G418濃度（ug/ml） |
|---|---|
| 中國倉鼠卵巢細(xì)胞 | 700-800 |
| Madin－Darby犬腎細(xì)胞 | 500 |
| 人上皮A431細(xì)胞 | 400 |
| 猿CV-1細(xì)胞 | 500 |
| 盤基網(wǎng)柄菌屬 | 10-35 |
| 植物 | 10 |
| 酵母 | 125-500 |
產(chǎn)品列表
| 產(chǎn)品號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | CAS | 包裝 |
|---|---|---|---|---|
| G274348 | G418硫酸鹽 | 超純級(jí) | 108321-42-2 | 1g,5g |
| G110917 | G418硫酸鹽 | potency≥650μg/mg | 108321-42-2 | 250mg,1g,5g |
| G301863 | G418溶液 | 25mg/ml,無菌 | 108321-42-2 | 1mL |