系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是以多種自身抗體、多系統(tǒng)受累為特征的自身免疫性疾病。SLE的發(fā)生是由于機體對自身抗原失去耐受，導致自身反應性B細胞的產生。這些B細胞分泌的自身抗體與自身抗原形成免疫復合物，引起炎癥和組織損傷，最終導致器官功能障礙。SLE最常見的并發(fā)癥是由免疫復合物介導的狼瘡性腎炎。目前，針對B細胞的治療策略對SLE患者有一定效果，但受限于分泌抗體的B細胞或漿細胞對消除治療的抵抗。因此，SLE中自身反應性B細胞的分化和維持的信號機制還不清楚。
2023年4月4日，中山大學附屬第一醫(yī)院張輝教授、楊念生教授團隊在Cell Metabolism上發(fā)表題為“Spleen
fibroblastic reticular cell-derived acetylcholine promotes lipid metabolism to
drive autoreactive B cell responses”的研究論文。
文章研究了脾臟網狀纖維細胞在系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）中自身反應性B細胞在免疫應答中的作用。研究發(fā)現(xiàn)，脾臟網狀纖維細胞分泌的乙酰膽堿能夠通過CD36受體促進B細胞的脂質攝取，從而增強B細胞的線粒體氧化磷酸化，提高B細胞的能量產生和分化能力。
證明了抑制脂肪酸氧化或者敲除B細胞中的CD36受體能夠減少自身反應性B細胞的產生和自身抗體的分泌，從而改善SLE小鼠的病情。本文揭示脾臟網狀纖維細胞通過乙酰膽堿介導的脂質代謝調節(jié)B細胞分化的新機制，為SLE的發(fā)病原因和治療靶點提供了新的線索。
實驗部分
脾臟的生發(fā)中心是在次級淋巴器官中的B細胞區(qū)（濾泡）內短暫形成的結構，成熟的B細胞在其中被激活、增殖、分化并突變其抗體基因。生發(fā)中心由多種細胞構成，包括B細胞、T輔助細胞和巨噬細胞等。由于脾臟生發(fā)中心的細胞構成復雜，切片形態(tài)結構呈現(xiàn)多種形態(tài)，在原位研究中，如何通過軟件算法精準定義其邊界，對生發(fā)中心大小數量進行定量研究的基礎。
本文使用TissueGnostics公司TissueFAXS Spectra全景多光譜組織掃描定量分析系統(tǒng)脾臟組織樣本進行多色熒光圖像采集。并且使用多重免疫熒光技術，通過AI Classifier技術獲得大量組織形態(tài)學信息，還結合了Tissue Cytometry技術中精準的聚集單細胞識別技術，通過定義多種細胞的相互密度關系，精確的識別到了脾臟生發(fā)中心的輪廓，并對FRCs及其分泌的乙酰膽堿影響下，對生發(fā)中心的增值和分化水平進行了精準定量。
Panel信息：B220 小鼠B細胞，CD3 T細胞，GP38 淋巴管內皮細胞，PNA 淋巴細胞成熟度
脾臟纖維網狀細胞（FRCs）通過膽堿能信號促進NZM2328小鼠的自身反應性B細胞。
為了進一步研究FRC來源的乙酰膽堿（Ach）在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的作用，對NZM2328小鼠進行了FRCs脾內注射(圖1A)。多重染色熒光樣本顯示，發(fā)現(xiàn)FRCs能夠增強生發(fā)中心（GC）反應，擴大GC的數量和大小，促進B細胞的分化和抗雙鏈DNA抗體的產生。
Fig 1 成纖維細胞網狀細胞通過乙酰膽堿促進NZM2328小鼠自身反應性B細胞
B：小鼠脾臟組織的MIF圖像(Gp38，綠色；B220，紅色；PNA，藍色)。
ACh增強NZM2328小鼠脂代謝和自身反應性B細胞反應
在NZM2328狼瘡小鼠的脾臟內注射了ACh，發(fā)現(xiàn)ACh能夠增加生發(fā)中心（GC）B細胞的鈣離子水平、脂質攝取和代謝、線粒體數量和氧耗率，從而促進GC B細胞和漿細胞（PCs）的分化。且發(fā)現(xiàn)ACh能夠增加抗雙鏈DNA抗體的產生，導致腎小球免疫復合物沉積、腎臟病理損傷和蛋白尿。
Fig 2 乙酰膽堿促進NZM2328小鼠脂肪酸代謝和自身反應性B細胞
(H)脾臟組織B220、CD3和PNA的MIF染色圖像。