類器官的培養(yǎng)是一種利用干細(xì)胞技術(shù)，模擬人體內(nèi)器官發(fā)育過程，構(gòu)建出具有類似器官結(jié)構(gòu)和功能的三維細(xì)胞培養(yǎng)模型。這種模型能夠幫助科學(xué)家更好地理解器官的發(fā)育、疾病的發(fā)生機(jī)制以及藥物的作用效果。類器官一般通過誘導(dǎo)和干預(yù)進(jìn)行類器官的純化，傳代也是培養(yǎng)類器官不可缺少的步驟；
但是消化類器官總是會莫名奇妙的出問題 ，有些類器官半天消化不下來，有些類器官換個液都能給沖下來，類器官怎么消化，來看看我們的總結(jié)吧！
一、如何判斷類器官可以消化了，小啟經(jīng)常采用以下三個方面來判斷：
1.更換新鮮的培養(yǎng)基后，第二天培養(yǎng)基就變黃了，并且類器官在4X鏡下整體有50%以上的匯合；
2. 有少部分類器官和細(xì)胞發(fā)生脫落現(xiàn)象，從Matrigel中脫離，漂浮在培養(yǎng)基中；
3. 細(xì)胞覆蓋Matrigel液滴的邊緣，顯微鏡下已經(jīng)看不到Matrigel膠，整個底部都是遷移的類器官。
判斷好類器官可以進(jìn)行消化了，我們就來整理下小啟在消化類器官踩的坑吧：
第一坑：打死都消化不下來的類器官：
腦癌類器官以培養(yǎng)時間長著稱，正常的培養(yǎng)沒個把月根本測不出類器官指數(shù)，于是消化成了這個細(xì)胞的難點(diǎn) ，類器官培養(yǎng)的經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)之一：培養(yǎng)的類器官在同一個孔中盡量不要時間太久， 越久越消化不下來，
培養(yǎng)超過一個月的類器官，不建議使用直接使用組織消化液消化，采用以下步驟消化類器官
1. 先用刮刀先把類器官刮下來，加適量的PBS洗滌后，收集到離心管中；
2. 采用100um的細(xì)胞濾網(wǎng)過濾，以攔截比較大塊的類器官；
3. 準(zhǔn)備新的離心管，將濾網(wǎng)反轉(zhuǎn)用PBS沖洗，將大的類器官沖洗下來；
4. 將沖洗的類器官混懸液進(jìn)行離心去除PBS，加入適量的組織消化液消化；37°水浴消化5分鐘后，用1000ul槍頭輕輕吹打20次左右，立刻加入同等的完全培養(yǎng)基終止。
5. 配平，1500轉(zhuǎn)離心3分，對于比較容易分散的類器官，如肝癌和腎癌類器官，可以采用瞬離的方法，瞬離的方法如下：設(shè)定轉(zhuǎn)速3000轉(zhuǎn)，配平，啟動離心機(jī)，當(dāng)轉(zhuǎn)速達(dá)到3000轉(zhuǎn)后立即按下停止鍵，待離心機(jī)停止轉(zhuǎn)動后，拿出離心管。
腦癌類器官消化后重新鋪板
第二坑：輕輕一碰就掉落的類器官
肝癌和滋養(yǎng)層是最容易掉落的類器官，即使有Matrigel給其吸附，但是稍不注意換個液都能掉落，前功盡棄，而且這類的類器官有趨光性，一旦Matrige稍微鋪的不均勻或者震板沒有做好，就大的很大，小的很小，而越大的越容易掉落，看著都惱火
組織消化酶（啟達(dá)生物，貨號：SD0013)
消化容易脫落的類器官采用的方法：
1. 預(yù)熱組織消化酶，一定要預(yù)熱；
2. 去除舊的培養(yǎng)基，向每個孔中加入500ul預(yù)熱的組織消化酶，以從Matrigel中回收類器官
3. 輕輕吸取組織消化酶和Matrigel液滴混合物上下2-3次，將Matrigel和類器官從孔中移出。
4. 將混懸液轉(zhuǎn)移到新無菌15 mL離心管中，每個15mL離心管最多可容納8個孔的類器官（即：體積約為4-6mL）
5. 將混合物在37℃水浴中孵育5分鐘，偶爾旋轉(zhuǎn)試管以混合類器官消化酶;
6. 用1000ul移液管抽吸類器官混懸液20-30次，以機(jī)械方式破壞和分離類器官為單細(xì)胞
7. 用相同體積的完全類器官培養(yǎng)基中和組織消化溶液
8. 將試管在1500轉(zhuǎn)下離心3分鐘；
9. 鋪在預(yù)先準(zhǔn)備的培養(yǎng)板中繼續(xù)培養(yǎng)或者凍存；