Calcein-AM/PI活死細胞雙染試劑盒
產品名稱： Calcein-AM/PI活死細胞雙染試劑盒
英文名稱： Calcein-AM/PI Double Stain Kit
產品編號： C331308
產品價格： 853
產品產地： 美國
品牌商標： Arcegen
更新時間： 2025-10-20T09:25:48
使用范圍： null
| 規格 | 價格 |
| 500T | 853.0 |
| 1000T | 1453.0 |
- 聯系人 : 孟醒
- 地址 : 申江南路4388號1幢2層208室
- 郵編 : 201314
- 所在區域 : 上海
- 電話 : 189****7703 點擊查看
- 傳真 : 點擊查看
- 郵箱 : cmeng@magibagbio.com
產品簡介
Calcein-AM/PI Double Stain Kit 活死細胞雙染試劑盒主要通過兩種染料 Calcein-AM 和 PI 對細胞進行活死 鑒別。
Calcein-AM 是一種對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑，發綠色熒光（Ex=490 nm, Em=515 nm）。它 穿透細胞膜進入細胞后能夠被細胞內的酯酶剪切形成 Calcein ，從而被滯留在細胞內 ，發出強綠色熒光。
因其在傳統的 Calcein（鈣黃綠素）基礎上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基團 ，增加了疏水性 ，它能夠更輕 易穿透活細胞膜。與其它同類試劑（如 BCECF-AM 和 CFDA)相比 ，由于 Calcein-AM 細胞毒性極低 ，是最 適合用于活細胞染色的熒光探針 ，且不會抑制任何細胞功能 ，如細胞增殖和淋巴球的趨化性。死細胞缺乏 酯酶活性 ，因此 ，Calcein-AM 常與死細胞熒光探針如碘化丙啶（PI）等聯合使用 ，同時進行活細胞和死細 胞的熒光雙重染色。碘化丙啶（Propidium iodide ，PI）不能穿過活細胞的細胞膜 ，僅能穿過死細胞膜的 無序區域而到達細胞核，并嵌入細胞的 DNA 雙螺旋從而產生紅色熒光（Ex=535 nm, Em=617 nm）。Calcein 和 PI-DNA 都可被 490 nm 激發，因此可用熒光顯微鏡同時觀察活細胞和死細胞。而用 545 nm 激發，僅可 觀察到死細胞。
根據我司優化的實驗體系 ，單次就 200 µL 細胞懸液進行染色 ，C331308E 和 C331308S 分別可以做 500 次和 1000 次檢測。
產品規格
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貨號 |
C331308E/C331308S |
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規格 |
500 T/1000 T |
組分信息
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組分編號 |
組分名稱 |
C331308E |
C331308S |
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C331308-A |
Calcein-AM Solution（2 mM） |
50 μL |
50 μL×2 |
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C331308-B |
PI Solution（1.5 mM） |
150 µL |
150 µL×2 |
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C331308-C |
10×Assay Buffer |
50 mL |
100 mL |
儲存條件
冰袋運輸；其中 A 組分和 B 組分需-20℃避光干燥保存 ，C 組分-20℃保存 ，經常使用可放在 4℃保存。一 年有效。
注意事項
1. 由于 Calcein-AM 對濕度非常敏感，Calcein-AM 溶液每次取完需要量后，必須緊緊密封蓋子。建議根
據單次用量 ，分裝密封保存。Calcein-AM 工作液必須現配現用。
2. 碘化丙啶（PI）有一定的致癌性 ，操作時一定要注意防護。若接觸到皮膚 ，需要立即用自來水清洗。
3. 為了您的安全和健康 ，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4. 本產品僅用于科研。
使用說明
1. 工作液的配制
1.1 1×Assay Buffer（反應緩沖液） 的配制
從冰箱內取出 10×Assay Buffer ，根據單次用量于無菌條件取出適量 ，用去離子水（dH2O）做 10 倍稀釋 以得到 1×Assay Buffer。
1.2 1×染色工作液的配制
1）先將低溫保存的 Calcein-AM 溶液 (2 mM)和 PI 溶液（1.5 mM） 回到室溫 20-30 min。 注意：第一次使用可對母液進行分裝 ，以減少反復凍融次數。
2）取 5 µL Calcein-AM 溶液 (2 mM)和 15 µL PI 溶液（1.5 mM）加入 5 mL 1×Assay Buffer ，充分混勻。 此時得到 Calcein-AM 的工作液濃度為 2 μM ，PI 的工作液濃度為 4.5 μM。由于不同細胞系的最佳染色條 件不同，初次實驗建議做梯度實驗 ，以確定 Calcein-AM 和 PI 的最適濃度。梯度篩選的原則為使用最低的 探針濃度得到最好的熒光結果。加入 500 µL CFDA-SE 溶劑到 1 管 CFDA-SE 熒光探針中進行溶解，充分混 勻即得到 1000×的儲存液。
【注意】該儲存液最好在 1 個月內使用完畢，最長不超過 2 個月。剩余儲存液請務必分裝后于≤-20℃避光 干燥保存 ，避免反復凍融 ，-70℃避光保存可適當延長保存周期。
2. 染色步驟
1) 對于貼壁細胞 ，先用細胞刮刀或者胰酶-EDTA 消化細胞 ，之后離心收集細胞（1000 rpm ，3 min）。 對于懸浮細胞 ，直接離心（1000 rpm ，3 min）收集細胞。
2) 去上清 ，用 1×Assay Buffer 充分清洗細胞 2~3 次 ，以充分去除殘留的酯酶活性。
3) 用 1×Assay Buffer 制備細胞懸液 ，使其密度為 1×105~1×106 細胞/mL。
4) 取 100 µL 染色工作液加入 200 µL 細胞懸液內 ，混勻 ，37℃孵育 15 min。注意：如果需要 ，可延長 孵育時間至 30 min。
5) 熒光顯微鏡下使用 490±10 nm 激發濾片同時檢測活細胞（黃綠色熒光） 以及死細胞（紅色熒光）。 另外 ，使用 545 nm 的發射濾片僅能觀察到死細胞。也可以直接在熒光酶標儀下進行檢測。
【注意】 可以使用以下方法來優化得到兩種熒光染料的最佳工作濃度。
a）用 0.1%皂素或者 0.1-0.5%地高辛孵育細胞 10 min ，或者用 70%乙醇孵育細胞 30 min ，制備死細胞。
b）用 0.1-10 µM 的 PI 溶液進行死細胞染色，以得到僅對細胞核染色而不會對細胞質染色的最佳工作濃度。
c）用 0.1-10 µM 的 Calcein-AM 進行死細胞染色 ，以得到不會對細胞質染色的最佳工作濃度。然后用此濃 度進行活細胞染色 ，去觀察是否活細胞能被染色。