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<h2 style="font-weight: 400; color: #000000;"><strong>產(chǎn)品簡介</strong></h2> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">ATP是細(xì)胞內(nèi)最重要的能量分子，可以用來衡量細(xì)胞新陳代謝水平，因此可通過ATP含量反應(yīng)活細(xì)胞的數(shù)目。ATP生物發(fā)光技術(shù)的原理是熒光素酶以熒光素、三磷酸腺苷（ATP）和O₂為底物，在Mg²⁺存在時(shí)，將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能，因此在一定范圍內(nèi)，ATP濃度與發(fā)光強(qiáng)度呈正比。基于這一原理，本試劑盒利用螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）催化底物&mdash;&mdash;熒光素的轉(zhuǎn)化，高效利用ATP的能量，發(fā)射出光子，發(fā)光信號(hào)可以反映ATP的量，而ATP的量可以反映細(xì)胞數(shù)目，從而達(dá)到檢測(cè)目的。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">本試劑盒提供的發(fā)光法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑線性范圍廣、靈敏度高、穩(wěn)定性好：96孔板中，在5個(gè)至100000個(gè)細(xì)胞范圍內(nèi)，迅速完成檢測(cè)，僅需10&nbsp;min；無需洗滌細(xì)胞，也無需更換或去除培養(yǎng)液；半衰期長，具有極好的穩(wěn)定性；相比于其他常見的細(xì)胞活力測(cè)定方法如Calcein-AM、CCK-8等，也更加簡便快捷。</p> <h2 style="font-weight: 400; color: #000000;"><strong>產(chǎn)品信息</strong></h2> <table style="width: 100%;" border="1" cellspacing="1"> <tbody> <tr> <td> <p style="font-weight: 400;">貨號(hào)</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">C331310E/C230102S/C230102M</p> </td> </tr> <tr> <td> <p style="font-weight: 400;">規(guī)格</p> </td> <td> <p style="font-weight: 400;">10 mL /100&nbsp;mL/10&times;100&nbsp;mL</p> </td> </tr> </tbody> </table> <h2 style="font-weight: 400; color: #000000;"><strong>儲(chǔ)存條件</strong></h2> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">-25~-15℃儲(chǔ)存，有效期1年。建議分裝保存，避免反復(fù)凍融。</p> <h2 style="font-weight: 400; color: #000000;"><strong>注意事項(xiàng)</strong></h2> <ol style="color: #000000; font-weight: 400;"> <li>熒光素酶活性對(duì)溫度比較敏感，所以反應(yīng)前細(xì)胞和檢測(cè)試劑均需平衡至室溫后再進(jìn)行測(cè)定。請(qǐng)勿室溫存放。</li> <li>檢測(cè)試劑請(qǐng)混勻后使用。</li> <li>本試劑盒的檢測(cè)試劑中含有熒光素酶，反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致其逐漸失活。為取得良好的使用效果，第一次解凍后可適當(dāng)分裝保存，但需注意分裝的容器不能有ATP污染。</li> <li>待測(cè)藥物的溶劑含量較高時(shí)可能會(huì)干擾熒光素酶反應(yīng)，從而影響化學(xué)發(fā)光信號(hào)。可以通過設(shè)置含有溶劑的細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)照孔排除溶劑的干擾。</li> <li>檢測(cè)時(shí)須使用適合于細(xì)胞培養(yǎng)的白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或 384孔板，相鄰孔之間會(huì)產(chǎn)生相互干擾。</li> <li>為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。</li> <li>本產(chǎn)品僅用于科研。</li> </ol> <p style="font-weight: 400; color: #000000;"><strong>使用說明</strong></p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;"><strong>1. 細(xì)胞培養(yǎng)</strong></p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">使用適合進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè)的96孔板，每孔接種100&nbsp;&mu;L細(xì)胞（根據(jù)培養(yǎng)時(shí)間確定初始接種的細(xì)胞密度，檢測(cè)時(shí)每孔細(xì)胞數(shù)量不宜超5萬個(gè)），同時(shí)設(shè)置不含細(xì)胞的培養(yǎng)液的孔作為陰性對(duì)照，37℃，5%&nbsp;CO2培養(yǎng)細(xì)胞。也可以設(shè)置細(xì)胞的濃度梯度，以得到最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。根據(jù)需要在合適的時(shí)間加藥處理細(xì)胞。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;"><strong>2.（可選）ATP&nbsp;標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作</strong></p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">把自備的ATP標(biāo)準(zhǔn)溶液用PBS稀釋成適當(dāng)?shù)臐舛忍荻龋?6孔板每孔加入100&nbsp;&mu;L的標(biāo)準(zhǔn)品。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;"><strong>3. 細(xì)胞活力檢測(cè)</strong></p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">1）融解凍存的發(fā)光法檢測(cè)試劑，并平衡至室溫（請(qǐng)勿在超過25℃以上環(huán)境進(jìn)行融化，避免活性減弱）</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">2）取出細(xì)胞培養(yǎng)板，室溫放置10-20 min，使培養(yǎng)板溫度平衡至室溫。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">3）96孔板每孔加入100&nbsp;&mu;L檢測(cè)試劑（384孔板每孔25&nbsp;&mu;L&nbsp;) (由于孔的邊緣效應(yīng)，可能會(huì)導(dǎo)致發(fā)光信號(hào)不穩(wěn)定，不建議在邊緣鋪板）。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">4）室溫振蕩2-5 min，以促進(jìn)細(xì)胞的裂解。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">5）不透明封板膜封板，室溫避光放置10 min，使發(fā)光信號(hào)達(dá)到最大。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">6）使用多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，檢測(cè)波長560 nm。根據(jù)儀器要求設(shè)置相應(yīng)的參數(shù)，每孔的檢測(cè)時(shí)間一般為0.25-1 s，具體需根據(jù)儀器的檢測(cè)靈敏度進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">7）根據(jù)化學(xué)發(fā)光讀數(shù)計(jì)算細(xì)胞的相對(duì)活力，或根據(jù)ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算ATP含量從而得出細(xì)胞的相對(duì)活力。</p> <p style="font-weight: 400; color: #000000;">【注】檢測(cè)效果因細(xì)胞的種類不同而異，對(duì)于一些ATP含量特別高的細(xì)胞，在細(xì)胞數(shù)量達(dá)到100000以上可能會(huì)出現(xiàn)化學(xué)發(fā)光讀數(shù)繼續(xù)升高，但喪失線性關(guān)系。</p>