慢病毒包裝試劑盒
產(chǎn)品名稱： 慢病毒包裝試劑盒
英文名稱： Lentiviral Packaging Kit
產(chǎn)品編號(hào)： C230129
產(chǎn)品價(jià)格： 2553
產(chǎn)品產(chǎn)地： 美國
品牌商標(biāo)： Arcegen
更新時(shí)間： 2025-10-20T09:25:48
使用范圍： null
| 規(guī)格 | 價(jià)格 |
| 10T | 2553.0 |
| 20T | 4253.0 |
| 40T | 7353.0 |
- 聯(lián)系人 : 孟醒
- 地址 : 申江南路4388號(hào)1幢2層208室
- 郵編 : 201314
- 所在區(qū)域 : 上海
- 電話 : 189****7703 點(diǎn)擊查看
- 傳真 : 點(diǎn)擊查看
- 郵箱 : cmeng@magibagbio.com
產(chǎn)品簡介
慢病毒包裝試劑盒（Lentiviral Packaging Kit） 由優(yōu)化的慢病毒包裝輔助質(zhì)粒混合物（Lentiviral Mix）、 表達(dá) eGFP 蛋白的對照質(zhì)粒和高效轉(zhuǎn)染試劑（Max Transfection Reagent）組成 ，可以兼容第二代和第三 代的慢病毒包裝質(zhì)粒 ，包裝時(shí)間周期短（一周之內(nèi)即可拿到純化好的高滴度慢病毒）、病毒滴度高 ，可應(yīng) 用于針對不同基因和藥物靶標(biāo)的臨床前細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品規(guī)格
|
貨號(hào) |
C230129E |
C230129S |
C230129M |
|
規(guī)格 |
10 T |
20 T |
40 T |
組分信息
|
類別 |
組分編號(hào) |
組分名稱 |
C230129E |
C230129S |
C230129M |
|
Part Ⅰ |
C230129-A |
Lentiviral Mix(1 μg/μL) |
100 μL |
200 μL |
400 μL |
|
C230129-B |
eGFP 對照質(zhì)粒（Amp+） |
1.5 μg |
1.5 μg |
1.5 μg |
|
|
Part Ⅱ |
C230129-C |
Max Transfection Reagent |
0.6 mL |
1.2 mL |
2×1.2 mL |
儲(chǔ)存條件
冰袋運(yùn)輸。Max Transfection Reagent（C230129-C）于 4℃保存 ，其余組分(C230129-A、C230129-B)均 于-20℃保存。保質(zhì)期一年有效。
注意事項(xiàng)
1. 為了您的安全和健康 ，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
2. 本產(chǎn)品僅用于科研。
使用說明
1. 慢病毒包裝所需其他材料（選用）
1) DMEM
2) FBS
3) Penicillin-Stretomycin
4) HEK 293T/293FT：慢病毒包裝及低度檢測所用工具細(xì)胞
5) Antibiotics：用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株篩選 ，如 Puromycin ，G418 等
6) Competent cells
2. 病毒包裝前的準(zhǔn)備
1) 慢病毒表達(dá)載體：包含病毒包裝 ，侵染和將病毒重組基因整合到基因組 DNA 中以便表達(dá)目的基因或 者 shRNA 的基本元件。
2) DNA 溶液的制備：質(zhì)粒 DNA 溶于無菌的 TE 或 ddH2O 中 ，以紫外光吸收法測定其濃度及純度，保證 所提質(zhì)粒 DNA 的 A260/A280 在 1.8～2.0 之間。
3) 細(xì)胞狀態(tài)： 良好的細(xì)胞狀態(tài)對病毒的包裝至關(guān)重要 ，避免細(xì)胞培養(yǎng)基有細(xì)菌、真菌或支原體的污染， 盡量使用傳代次數(shù)較少的細(xì)胞 ，如果細(xì)胞是剛復(fù)蘇的話 ，最好傳兩代之后再包裝。
4) 慢病毒包裝：Arcegen 生物慢病毒載體表達(dá)系統(tǒng)由 pGMLV 慢病毒載體和 Lentiviral Mix 質(zhì)粒組成。
pGMLV 慢載體中含有 HIV 的基本元件 5’LTR 和 3’LTR 以及其他輔助元件，例如 WPRE 和 cPPT/CTS 等。Arcegen 可以根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康尼槍?pGMLV 載體改造以進(jìn)行啟動(dòng)子活性研究、基因表達(dá)研究、 RNA 干擾等研究。Lentiviral Mix 能夠表達(dá)病毒包裝需要的各種必需成分如：gag 基因 ，編碼病毒主 要的結(jié)構(gòu)蛋白；pol 基因 ，編碼病毒特異性的酶；rev 基因 ，編碼調(diào)節(jié) gag 和 pol 基因表達(dá)的調(diào)節(jié)因 子；還含有單純皰疹病毒來源的 VSV-G 基因，提供病毒包裝所需要的包膜蛋白，可以兼容第二代和第
三代的慢病毒包裝質(zhì)粒。
3. 慢病毒包裝
制備編碼慢病毒顆粒的重組病毒質(zhì)粒及其輔助包裝原件載體質(zhì)粒 ，重組質(zhì)粒載體和輔助質(zhì)粒載體分別進(jìn)行 高純度無內(nèi)毒素抽提，使用 Max Transfection Reagent 進(jìn)行共轉(zhuǎn)染 293T 細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后 18 h 更換為完全培 養(yǎng)基，培養(yǎng) 48 h 后，收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液，對其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液，在 293T 細(xì)胞中測定病毒滴度。在一定滴度范圍內(nèi)的慢病毒顆粒可以滿足大部分體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)需求。
1) 293T 細(xì)胞分盤：轉(zhuǎn)染前一天，將已經(jīng)長好的細(xì)胞以合適比例傳代到 10 cm 培養(yǎng)皿中，當(dāng)細(xì)胞長到~80% 時(shí)準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染。
2) 轉(zhuǎn)染前換液：轉(zhuǎn)染前 1~2 h 將需要轉(zhuǎn)染的細(xì)胞換新鮮的培養(yǎng)基 ，12 mL/10 cm 皿。注意：293T 細(xì)胞 貼壁性不是很好 ，換液時(shí)應(yīng)小心滴加盡量避免沖起細(xì)胞。
3) 轉(zhuǎn)染：取無菌的 1.5 mL EP 管或 15 mL 離心管 ，按下列組分配制反應(yīng)體系：
|
無血清 DMEM |
1 mL |
|
DNA |
10 μg |
|
Lentiviral Mix |
10 μL(10 μg) |
|
Max Transfection Reagent |
60 μL |
混勻后 ，室溫放置 18 min~20 min 后 ，均勻滴加到提前換過液的培養(yǎng)皿中 ，后置于 CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4) 換液：轉(zhuǎn)染 18~20 h 后，小心吸掉細(xì)胞培養(yǎng)液棄于盛有消毒液的廢液杯中（注意：此時(shí)培養(yǎng)基中已含 有少量的病毒，必須經(jīng)處理后才能丟棄，所用的移液槍頭等必須經(jīng)消毒液浸泡處理后才能丟棄），然 后加 15 mL 新鮮的培養(yǎng)基（也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求換為無血清的 DMEM）繼續(xù)培養(yǎng)。
5) 病毒收集：換液 48 h 后 ，吸取細(xì)胞上清液于 50 mL 離心管，4℃ , 500 g 離心 5 min ，上清液用 0.45 μm 濾器過濾后轉(zhuǎn)移到新的離心管中。此時(shí)上清液中的病毒顆粒可以直接去檢測滴度或者感染目的細(xì) 胞 ，如果對病毒的滴度及純度有較高要求 ，可對上清液進(jìn)行濃縮與純化。
6) 病毒分裝與保存：將病毒以 40~50 μL 分裝 ，后保存于-80℃。