【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：乙型流感病毒檢測試劑盒（實時熒光RT-PCR法）
英文名稱：Influenza B virus?Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包裝規(guī)格】25T/盒 & 50T/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒利用實時熒光PCR原理，定性檢測乙型流感病毒，對乙型流感病毒引起的感冒癥狀及其并發(fā)癥的診斷及療效評估有重要指導(dǎo)意義。
【檢驗原理】
本試劑盒針對乙型流感病毒基因組高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針，在反應(yīng)體系中含乙型流感基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應(yīng)通道的信號強(qiáng)度進(jìn)行實時監(jiān)測和輸出，實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。
【主要組成成份】
|
序號 |
組成 |
25T/盒 |
50T/盒 |
|
1 |
乙流 RT-PCR反應(yīng)液 |
437.5μL×1管 |
875?μL×1管 |
|
2 |
乙流?混合酶 |
62.5?μL×1管 |
125?μL×1管 |
|
3 |
乙流?陽性對照 |
40?μL×1管 |
40 μL×1管 |
|
4 |
乙流?陰性對照 |
40 μL×1管 |
40 μL×1管 |
|
5 |
說明書 |
1份 |
1份 |
注：陰性對照為人基因組DNA，陽性對照為失去活性的乙型流感病毒cDNA。
【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復(fù)凍融，有效期12個月。
【適用儀器】Funglyn Biotech FTC-3000系列，Molarray MA-6000系列、MA-1620Q系列、ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。
【樣本要求】
采用鼻拭子、咽拭子等方法獲得樣本。具體操作方法如下：
（1）鼻拭子： 操作者將沾濕的無菌拭子平行于上腭的角度輕輕地左右轉(zhuǎn)動從一側(cè)鼻孔插入至鼻道內(nèi)鼻腭處，一般當(dāng)拭子插入有阻力時再將拭子停留2～3s后緩慢轉(zhuǎn)動退出。
（2）咽拭子：操作者一手持壓舌板壓住病人舌后根，另一手拿住無菌拭子根部，然后將沾濕的無菌拭子左右兩面及拭子頭部快速且較用力地分別刮取扁桃腺兩側(cè)及咽后壁的分泌物。
（3）將鼻拭子和咽拭子一起放人盛有1.0ml生理鹽水的離心管中備用。
應(yīng)避免標(biāo)本間交叉污染。
標(biāo)本收集后可立即檢測；若不能立即檢測，可置于2～8℃冷藏過夜保存；如需長期保存，標(biāo)本應(yīng)凍存于-80℃以下，避免反復(fù)凍融。
【檢驗方法】
1.?試劑準(zhǔn)備（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。
（2）核算當(dāng)次實驗所需要的反應(yīng)數(shù)（n），并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計算當(dāng)次實驗所需要的各種試劑量。
n =陰性對照數(shù)（1T）+陽性對照數(shù)（1T）+誤差預(yù)留量（1T）+樣本數(shù)
|
單反液配制表(每份) |
RT-PCR反應(yīng)液 |
17.5μL |
|
混合酶液 |
?2.5?μL |
（3）在無菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。
2.樣本準(zhǔn)備（樣本處理區(qū)）
用RNA提取試劑盒提取RNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作。
3.加樣
在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測標(biāo)本RNA各5 μl、終體積25 μl/管，蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為25μl/管，蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上.
4. PCR（PCR擴(kuò)增區(qū)）
（1）取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置，并記錄放置順序。
（2）按下表設(shè)置儀器核酸擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
|
反應(yīng)體積 |
25 μL |
通道選擇 |
FAM通道采集?乙流?熒光信號 |
|
?PCR 反應(yīng) 條件 |
步驟 |
條件 |
循環(huán)數(shù) |
|
反轉(zhuǎn)錄 |
50℃：10分鐘（min） |
1 |
|
|
預(yù)變性 |
95℃：3分鐘（min） |
1 |
|
|
PCR擴(kuò)增 |
95℃：5秒（s） |
上海雅吉生物科技有限公司 商家主頁地 址： 上海市閔行區(qū)元江路5500號第1幢5658室 聯(lián)系人： 王源 電 話： 15301693058 傳 真： 021-34661275 Email：yajikit@163.com 相關(guān)咨詢人原代附睪管上皮細(xì)胞 (2021-07-08T14:16 瀏覽數(shù):25786) 雅吉生物熱烈慶祝中國建黨100周年 (2021-07-02T09:17 瀏覽數(shù):20600) 15P-1 (小鼠睪丸上皮細(xì)胞) (STR鑒定正確) (2021-06-23T09:59 瀏覽數(shù):23517) 客戶細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的問題說明 (2021-06-18T09:54 瀏覽數(shù):26510) 免疫熒光鑒定步驟 (2021-06-18T09:54 瀏覽數(shù):27726) 人真皮成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)制備方式 (2021-06-17T09:04 瀏覽數(shù):23915) 原代角質(zhì)形成細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法 (2021-06-17T09:03 瀏覽數(shù):27100) 鉆石探頭量子顯微鏡可以探索納米微觀世界的奧秘 (2021-06-16T09:24 瀏覽數(shù):25560) 過氧化物酶體活化受體可以加劇腫瘤形成 (2021-06-16T09:23 瀏覽數(shù):23459) 式細(xì)胞術(shù)數(shù)據(jù)分析之——圈門技巧 (2021-06-15T10:11 瀏覽數(shù):23473) ADVERTISEMENT
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