產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
??? 對(duì)微量的雙鏈DNA進(jìn)行定量在各種生物學(xué)應(yīng)用中都顯得非常重要。例如cDNA文庫(kù)的構(gòu)建，亞克隆的DNA
片段的純化，定量DNA擴(kuò)增產(chǎn)物，在藥物中DNA分子殘留的測(cè)定等。檢測(cè)核酸濃度最常用的方法就是檢測(cè)
核酸再260nm (A260)處的光吸收，此方法主要的缺點(diǎn)是單鏈核酸和單核苷酸會(huì)產(chǎn)生干擾信號(hào)，核酸樣品中的雜質(zhì)也會(huì)影向結(jié)果。光吸收不能區(qū)分DNA和RNA，靈敏度也相對(duì)較低（用1cm的比色杯在A260值為0.1時(shí)相對(duì)應(yīng)的雙鏈DNA濃度為5μg/mL）。Peko Green(TM) 染料是一種新型的dDNA染料。其檢測(cè)靈敏度高，可檢測(cè)到pg級(jí)DNA。檢測(cè)范圍寬，可跨越4個(gè)數(shù)量級(jí)。特異性好，基本不受ssDNA和RNA的影響，并且可以耐受一定濃度的鹽，尿素，已醇，氯仿，去垢劑，蛋白等干擾。目前使用Peko Green(TM) 染料定量檢測(cè)DNA已經(jīng)廣泛用于生物學(xué)檢測(cè)。
光學(xué)性質(zhì):
激發(fā)波長(zhǎng)= 502 nm
發(fā)射波長(zhǎng)= 523 nm
實(shí)驗(yàn)方法：
1. 試劑準(zhǔn)備
Peko Green是以1毫升的濃縮液形式保存在無(wú)水DMSO（二甲基亞砜）中。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，配制2x Peko
Green試劑的工作溶液,用1xTE液（10mM的Tris-HCl，1mM EDTA中，pH值為7.5）按1:200的比例稀釋濃縮液。如果要準(zhǔn)備好足夠的工作液檢測(cè)20個(gè)樣品，可在20毫升1xTE加入100mL Peko Green dsDNA定量試劑。由于試劑容易吸附到玻璃表面，要在一個(gè)塑料容器中配制。Peko Green試劑容易光降解，所以應(yīng)將配好的溶液用箔包主或放置暗處避光保存。
溶液最好在配制數(shù)小時(shí)內(nèi)使用，以保證最佳結(jié)果。
2.DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)
* 標(biāo)準(zhǔn)品工作液的配制：Sigma小牛胸腺DNA干粉（貨號(hào)：D4522-1MG）1mg (Tris,
NaCL等濃度已成標(biāo)準(zhǔn)體系)，加入1mL雙蒸水，配制成1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。
* 標(biāo)準(zhǔn)品工作液的稀釋?zhuān)?BR>* 母液稀釋?zhuān)喝?0mL(1mg/mL) 標(biāo)準(zhǔn)品工作液加入到990
mLTE溶液中，稀釋成10mg/mL。再取10mL（10mg/mL）標(biāo)準(zhǔn)品工作液加入到990
mLTE溶液中，稀釋成100ng/mL。
* 倍比稀釋?zhuān)喝?00mL(100ng/mL) 標(biāo)準(zhǔn)品工作液加入到200
mLTE溶液中，稀釋成80ng/mL（藥典規(guī)定：熒光染色方法DNA含量在。25-
80ng/mL范圍線(xiàn)性較好，此方法DNA檢出限為0.3ng/mL）。再取500mL（80ng/mL）標(biāo)準(zhǔn)品工作
液加入到500
mLTE溶液中，濃度稀釋到40ng/mL。然后按倍比稀釋成20ng/mL，10ng/mL，5ng/mL，2.5ng/m
L，1.25ng/mL，0.625ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，見(jiàn)表1。
1標(biāo)準(zhǔn)品工作液及樣品排續(xù)在一個(gè)實(shí)心的黑色96孔板*
S0 DS0? …. ….
樣品 樣品
S1? DS1? …. …. …. ….
S2? DS2
S3? DS3
S4? DS4
S5? DS5
S6 DS6
S7 DS7注: DS= 標(biāo)準(zhǔn)品工作液從0到40ng/mL平行樣品。
雙鏈DNA樣品分析：
* 倍比稀釋后的各梯度標(biāo)準(zhǔn)品溶液，樣品，和染料工作液各取100mL混勻，避光室溫放置5分鐘見(jiàn)表1。
備注: 如果用 384孔板, 則倍比稀釋后的各梯度標(biāo)準(zhǔn)品溶液，樣品，和染料工作液各取25mL即可。
* 用熒光酶標(biāo)儀在激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)= 490/525 nm（截止波長(zhǎng)為510 nm）檢測(cè)熒光強(qiáng)度。
* 樣品DNA 含量可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品曲線(xiàn)算出。
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