人類嗜T淋巴細(xì)胞病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒-產(chǎn)品資訊-資訊-生物在線

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人類嗜T淋巴細(xì)胞病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒

作者:上海雅吉生物科技有限公司 2021-05-28T09:20 (訪問量:8914)

人類嗜T淋巴細(xì)胞病毒1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 產(chǎn)品及特點(diǎn)

人類嗜 T 淋巴細(xì)胞病毒 1 型(Human T-lymphotropic Virus 1 HTLV 1)是一種感染后可導(dǎo)致血癌或其他轉(zhuǎn)移癌的 RNA 病毒,在體內(nèi)主要感染 CD4+T淋巴細(xì)胞可引起成人 T 淋巴細(xì)胞白血病/淋巴瘤、HTLV 相關(guān)脊髓?。℉TLV-Iassociated myelopathy , HAM/ 熱帶痙攣性下肢癱, tropical spasticparaparesis TSP)及色素層炎(uveitis),主要通過輸血、針頭、性行為、母子傳染。HTLV-I 病毒是愛滋病毒(HTLV-I) 的遠(yuǎn)親,但 HTLV-I 和愛滋病的發(fā)生沒有任何關(guān)連。目前各捐血中心以酵素免疫法全面篩檢 HTLV-I 病毒。
本產(chǎn)品就是以探針法熒光定量 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的人類嗜 T 淋巴細(xì)胞病毒 1 型探針法熒光定量 RT-PCR 試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 RNA 模板。
2.引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3.提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4.特異性高,引物是根據(jù)人類嗜 T 淋巴細(xì)胞病毒 1 型高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會跟其他病毒的 RNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。
5.本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6.本產(chǎn)品只能用于科研。

成分

編號

十孔盒包裝

探針法 qRT-PCR 緩沖液

190504a

500μL(藍(lán)蓋)

探針法 qRT-PCR 酶混合液

190504b

100μL(紅蓋)

熒光 PCR 專用模板稀釋液

180701

1 mL(黃蓋)

人類嗜 T 淋巴細(xì)胞病毒 1 型探針

15-87810yw

100 μL(白蓋)

法 qRT-PCR 引物混合液

人類嗜 T 淋巴細(xì)胞病毒 1 型

15-87810pb

50 μL(棕色管)

qRT-PCR 探針

人類嗜 T 淋巴細(xì)胞病毒 1 型探針

法 qRT-PCR 陽性對照

60908-87810pc

50 μL(黃蓋)

(1×10E8 拷貝/μL)

使用手冊

15-87810sc

1 份

人類嗜T淋巴細(xì)胞病毒1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 使用方法
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。
1.標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。
3.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 RNA 的制備
7.如果有 N 個(gè)樣品,最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽性對照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 陽性對照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。
8.用自選方法純化樣品的 RNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的柱式病毒 RNAout。
三、Probe qRT-PCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9.如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個(gè)用于 PCR 陽性對照(用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加):

    成分

    陰性對照

    樣品管

    N+2 個(gè)

    (2-7 管)

    探針法 qRT-PCR 緩沖液

    各 10 μL

    10 μL

    各 10 μL

    探針法 qRT-PCR 酶混合液

    各 2 μL

    2 μL

    各 2 μL

    人類嗜 T 淋巴細(xì)胞病毒 1 型 qRT-

    各 1 μL

    1 μL

    各 1 μL

    PCR 探針

    人類嗜 T 淋巴細(xì)胞病毒 1 型探針

    各 2 μL

    2 μL

    各 2 μL

    法 qRT-PCR 引物混合液

    待測樣品 RNA 模板

    各 5 μL

    -

    -

    超純水

    -

    5 μL

    -

    各 5 μL(2

    第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液

    -

    -

    號樣到2號

    (2-7 號)

    管,3 號樣到

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