內(nèi)置分析軟件

● 借助功能強(qiáng)大而易于操作的軟件，用戶可以自由控制壓痕程序（載荷、位移等）。自動處理曲線的流程，可以獲得數(shù)據(jù)和結(jié)果的快速分析

● 原始參數(shù)完整txt導(dǎo)出，便于后續(xù)復(fù)雜處理的需要

● 利用Hertz接觸模型從加載部分計算彈性模量，與常用的Oliver&Pharr方法相比，更為適合生物組織和軟物質(zhì)材料特性

近期文獻(xiàn)

Chiaro人體組織和軟材料的機(jī)械性能-杭州軒轅科技有限公司?www.p2ptest.com/Products-37284270.html

題目：人心房成纖維細(xì)胞對基質(zhì)剛度異質(zhì)性的適應(yīng)

（如果需要完整文獻(xiàn)請與我們工作人員聯(lián)系，可試樣）

摘要：纖維化與衰老和許多心臟病有關(guān)。其特征在于肌成纖維細(xì)胞分化和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的過度積累。纖維化相關(guān)的組織重塑導(dǎo)致組織結(jié)構(gòu)和功能的顯著變化，包括被動機(jī)械性能。隨著最近開發(fā)的新工具和方法，該研究領(lǐng)域獲得了顯著的發(fā)展，以更好地表征和理解細(xì)胞感知和響應(yīng)其生物物理環(huán)境的能力。我們使用一種稱為CyPhyGel的新型水凝膠來提供與重塑相關(guān)的組織硬度變化的先進(jìn)體外模型。基于藍(lán)藻光敏色素的光控二聚化，它能夠以高空間和時間分辨率對水凝膠機(jī)械性能進(jìn)行非接觸式和可逆調(diào)諧。在CyPhyGels上培養(yǎng)人原代心房成纖維細(xì)胞。在硬質(zhì)（~4.6 kPa）或軟質(zhì)（~2.7 kPa）CyPhyGels上培養(yǎng)4天后，我們分析了成纖維細(xì)胞面積和硬度。與在較硬的基質(zhì)上生長的細(xì)胞相比，在較軟的基質(zhì)上生長的細(xì)胞更小更軟。當(dāng)軟質(zhì)和硬質(zhì)生長底物組合在單個CyPhyGel中時，不存在這種差異，產(chǎn)生的細(xì)胞面積與均質(zhì)剛性凝膠上的細(xì)胞面積相似，細(xì)胞剛度與均質(zhì)軟基質(zhì)上的細(xì)胞剛度相似。使用CyPhyGels在體外模擬組織硬度異質(zhì)性，我們的結(jié)果證實了心臟成纖維細(xì)胞適應(yīng)其機(jī)械環(huán)境的能力，并表明存在一種旁分泌機(jī)制，該機(jī)制可以調(diào)整與機(jī)械誘導(dǎo)的表型向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化相關(guān)的成纖維細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能特性。在局部組織硬度增加的情況下，例如在瘢痕形成或彌漫性纖維化時，這種機(jī)制可以幫助防止正常組織和患病組織之間邊界區(qū)域的細(xì)胞特性突然變化。CyPhyGeles的光可調(diào)機(jī)械性能及其對研究人類原代心臟細(xì)胞的適用性使其成為心臟力學(xué)生物學(xué)研究的有吸引力的模型系統(tǒng)。進(jìn)一步的研究將探索生物物理和可溶性因素在心臟成纖維細(xì)胞對空間和時間異質(zhì)機(jī)械線索的反應(yīng)中的相互作用。

一、介紹

由于衰老、機(jī)械超負(fù)荷或損傷等原因引起的心臟組織損傷與纖維化的發(fā)展有關(guān)。纖維化的特征在于肌成纖維細(xì)胞分化和細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）蛋白的過度積累（Herum等人，2017）。這種重塑主要是由成纖維細(xì)胞驅(qū)動的（Manabe等人，2002;Travers等人，2016），組織結(jié)構(gòu)和力學(xué)的變化，其后果從心輸出量受損到心律失常脆弱性增加（Nguyen和Qu，2014）。最終，纖維化的存在和程度是心臟性猝死的主要危險因素（Disertori等人，2016）。到目前為止，還沒有有效的治療方法來逆轉(zhuǎn)心臟纖維化，主要是由于對潛在的基本機(jī)制了解不足。

可能的治療方法必須考慮組織力學(xué)的變化，這既是重塑的原因，也是重塑的結(jié)果。成纖維細(xì)胞對其機(jī)械環(huán)境的感知已被證明在纖維化重塑中發(fā)揮作用（Hinz，2013;范普滕等人，2016 年）。近年來，已經(jīng)開發(fā)了幾種體外模型來研究成纖維細(xì)胞機(jī)械傳感。這些模型中的主要一類使用合成基材，包括水凝膠和有機(jī)硅。這些允許研究人員規(guī)定培養(yǎng)細(xì)胞的機(jī)械環(huán)境（Rosales和Kristi，2016;李等人，2018）。或者，天然存在的底物，如脫細(xì)胞組織（Ott等人，2008）或活的心臟組織切片（Perbellini等人，2018）已被用于為細(xì)胞提供近生理生長底物，但這些是更復(fù)雜且可重復(fù)性較差的模型。更接近地模擬體內(nèi)條件的底物是必不可少的，因為當(dāng)ECM生產(chǎn)克服退化時，纖維化組織的整體剛度提高（Levental等人，2010），剛度分布是高度異質(zhì)的。具有或多或少ECM的區(qū)域構(gòu)成了不同的機(jī)械微域。在彌漫性纖維化中，例如在心房顫動中，僵硬的ECM島分布在較軟的組織中（Tanaka等人，2007）。鑒于對單細(xì)胞的機(jī)械效應(yīng)主要由其微環(huán)境主導(dǎo)，體外模型應(yīng)復(fù)制這些剛度異質(zhì)性，理想情況下以可控的方式。

允許在機(jī)械性能中引入空間梯度的模型已被用于證明成纖維細(xì)胞的剛度引導(dǎo)遷移，這一過程稱為durotaxis，取決于基質(zhì)蛋白的類型（Hartman等人，2017）。此外，具有微圖案剛性和軟區(qū)域的水凝膠用于顯示細(xì)胞在各種剛度上的適應(yīng)性（Sunyer等人，2012），并研究基質(zhì)組織對間充質(zhì)干細(xì)胞分化的作用（Yang等人，2016）。然而，這些模型不允許人們在時間或空間上動態(tài)和可逆地改變生長基質(zhì)的被動機(jī)械性能。基于藍(lán)藻光敏色素Cph1的新型水凝膠系統(tǒng)（我們在這里稱為CyPhyGel）可以通過允許水凝膠硬度的光控，可逆變化來解決這一限制（H?rner等人，2019b）。為此，使用細(xì)胞兼容的紅光在其單體（740nm）或二聚體（660nm）形式之間切換Cph1，從而分別以非接觸方式減少或增加生長基質(zhì)中的交聯(lián)數(shù)量。CyPhyGels的剛度可以在1.5和5.5 kPa（有效楊氏模量）之間變化。剛度的變化發(fā)生在照明的幾秒鐘內(nèi)，是可分級的，在沒有光線的情況下是穩(wěn)定的，并且是可逆的（H?rner等人，2019b）。在這項研究中，我們使用CyPhyGels來研究人類心臟成纖維細(xì)胞對杜羅抗性以外機(jī)械環(huán)境剛度異質(zhì)性的適應(yīng)。

二、材料和方法

CyPhyGels和成纖維細(xì)胞的納米壓痕

有效楊氏模量，E伊芙，使用Chiaro納米壓痕系統(tǒng)（Optics11，荷蘭阿姆斯特丹）進(jìn)行評估。連接到校準(zhǔn)懸臂上的球形尖端用于壓痕樣品，同時將激光束照射到反射懸臂表面上。對反射的激光進(jìn)行干涉分析，以測量與懸臂彎曲相關(guān)的相移。由此計算出樣品壓痕所需的力。E伊芙使用接觸力學(xué)的赫茲模型推導(dǎo)（赫茲，1881;陳，2014）假設(shè)不可壓縮材料的泊松比為0.5，通常用于細(xì)胞和組織的機(jī)械測試（圖1B;Guz 等人，2014 年）。在整份手稿中，E伊芙稱為剛度。以5 μm/s的置換速度進(jìn)行2–4 μm的樣品壓痕。數(shù)據(jù)分析使用 Optics11 DataViewer （V2.0.27）。

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對于CyPhyGel表征，使用了彈簧常數(shù)為0.45–0.5 N/m且尖端半徑為20–23 μm的懸臂。對于細(xì)胞評估，使用彈簧常數(shù)為0.01-0.02 N/m的懸臂和半徑為3-3.5μm的尖端。通過在兩到三個與細(xì)胞核不重疊的不同位置進(jìn)行表面法向壓痕來確定單個細(xì)胞的剛度。對于每個壓痕，使用赫茲模型來擬合從初始細(xì)胞表面接觸到1μm壓痕的力 - 位移曲線，以避免來自底層生長基質(zhì)的機(jī)械干擾。在接種CyPhyGels后4天評估細(xì)胞硬度。

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結(jié)果

通過光調(diào)節(jié)CyPhyGels的機(jī)械性能

均勻暴露在660 nm照明下的CyPhyGels具有E伊芙4.59 ± 0.11 kPa，而用 740 nm 照明后，E伊芙分別為 2.72 ± 0.06 kPa（圖 2A，B）。相似的最大值和最小值 E伊芙發(fā)現(xiàn)了異質(zhì)CyPhyGels的兩個差異調(diào)諧的一半。為了對剛度梯度進(jìn)行空間表征，以50μm的步長繪制了異質(zhì)CyPhyGels，沿著垂直于其剛性和軟性兩半之間邊界的線繪制。E伊芙從 4.48 ± 0.58 變?yōu)?2.12 ± 0.30 kPa（圖 2C）。在邊界附近使用更高分辨率的步長（5μm），我們發(fā)現(xiàn)剛性和軟區(qū)域之間的過渡發(fā)生在100-150μm的寬帶內(nèi)（圖2D）。邊界區(qū)域的寬度至少在1毫米以上是恒定的（補(bǔ)充圖S3）。

圖2

圖2.CyPhyGels的機(jī)械性能。（A）本實驗中使用的CyPhyGel配置的示意圖。（二）E伊芙的CyPhyGels，暴露于660或740nm（n = 24）的均勻照明或順序照明，因此機(jī)械異質(zhì)（n = 4），通過納米壓痕測定。（三） E伊芙沿著垂直于三個代表性異質(zhì)CyPhyGels的剛性和軟性兩半之間邊界的軸，說明了凝膠剛度的階躍變化（連續(xù)測量點之間的距離為50μm，n = 3）。（D）從圖C對凝膠3中的過渡區(qū)域進(jìn)行更高分辨率的評估（測量點之間的距離為5μm）。（E） E伊芙在照明后（第0天）和6天后立即從圖C獲得凝膠3，對應(yīng)于實驗的持續(xù)時間。

為了評估CyPhyGel剛度的異質(zhì)性是否隨時間推移而持續(xù)，在順序照明后6天測量了剛度，這對應(yīng)于實驗的持續(xù)時間。具有不同剛度的兩個區(qū)域仍然清晰可辨（圖2E）。6天內(nèi)柔軟區(qū)域的硬度略有增加是由于在CyPhyGel處理和細(xì)胞培養(yǎng)過程中暴露于外部光線（補(bǔ)充圖S2）。

結(jié)論

我們提出了一種新的體外模型，適用于研究對基質(zhì)剛度局部和時間變化的動態(tài)生物學(xué)反應(yīng)。該模型將用于闡明不同機(jī)械微環(huán)境中細(xì)胞之間的通信機(jī)制，例如模擬纖維化或瘢痕性心肌。我們的結(jié)果表明，心臟成纖維細(xì)胞對生長基質(zhì)機(jī)械特性的適應(yīng)可以通過旁分泌因子以及直接的細(xì)胞 - 細(xì)胞接觸來調(diào)節(jié)。

Optics11成立于2011年，是阿姆斯特丹自由大學(xué)(VU)的衍生組織。從那時起，這家初創(chuàng)公司的收入和員工持續(xù)增長，成為荷蘭發(fā)展最快的公司之一，并具有國際影響力。Optics11 Life提供功能強(qiáng)大的新型納米壓痕儀，與傳統(tǒng)的同類產(chǎn)品相比，使用方便、功能多樣、堅固耐用。主要用于測量復(fù)雜、不規(guī)則的生物材料，如單細(xì)胞、組織、水凝膠和涂層的機(jī)械性能。

Piuma Nanoindenter

生物組織、軟物質(zhì)材料力學(xué)性能測試的新方法

Piuma是功能強(qiáng)大的臺式儀器，可探索水凝膠、生理組織和生物工程材料的微觀機(jī)械特性。表征尺度從宏觀直至細(xì)胞。專為分析測試軟材料而設(shè)計，測量復(fù)雜和不規(guī)則材料在生理條件下的力學(xué)性能。

主要優(yōu)勢

● 內(nèi)置攝像鏡頭，方便實時觀察樣品臺

● 實時分析計算測量結(jié)果，原始數(shù)據(jù)并將以文本文件存儲，方便任何時候?qū)隓ataviewer軟件進(jìn)行復(fù)雜處理

● 探針經(jīng)過預(yù)先校準(zhǔn)，即插即用。對于時間敏感的樣品確保了快速測量

● 光纖干涉MEMS技術(shù)能夠以無損的方式測量即使是最軟的材料，并保證分辨率。同時探針可以重復(fù)使用

技術(shù)參數(shù)