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DNA 含量檢測(cè)試劑盒（細(xì)胞周期）
DNA Content Quantitation Assay(Cell Cycle)
貨號(hào)：CA1510
規(guī)格：20T/50T
保存：-20℃避光保存，一年有效。
產(chǎn)品說(shuō)明：
? ? ? ? 細(xì)胞周期是指連續(xù)分裂細(xì)胞從一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂結(jié)束所經(jīng)歷的整個(gè)過(guò)程。在 這個(gè)過(guò)程中，細(xì)胞遺傳物質(zhì)復(fù)制并加倍，且在分裂結(jié)束時(shí)平均分配到兩個(gè)子細(xì)胞中去。細(xì)胞周期又 可以分為間期和有絲分裂期，細(xì)胞間期常劃分為休眠期（G0），DNA 合成前期（G1），DNA 合成期 （S），DNA 合成后期（G2），整個(gè)周期可表示為 G1→S→G2→M。DNA 周期檢測(cè)可用來(lái)反應(yīng)細(xì)胞周 期的各個(gè)期的狀況，即細(xì)胞增殖狀況。利用細(xì)胞內(nèi) DNA 能夠和熒光染料（如碘化丙啶 PI）結(jié)合的 特性，細(xì)胞各個(gè)時(shí)期其 DNA 含量不同從而結(jié)合的熒光染料不同，流式細(xì)胞儀檢測(cè)的熒光強(qiáng)度也不 一樣。
? ? ? ? 細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮，核裂解，產(chǎn)生凋亡小體，使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生 變化。在細(xì)胞凋亡的早期，細(xì)胞對(duì)前向角光散射的能力顯著降低，對(duì) 90°角光散射的能力增加或沒(méi) 有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期，前向角和 90°角光散射的信號(hào)均降低。因此可以通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定 細(xì)胞光散射的變化來(lái)觀察凋亡細(xì)胞。用 PI 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，凋亡細(xì)胞由于總 DNA 量降低，于正常 G0/G1細(xì)胞群前出現(xiàn) DNA 低染細(xì)胞群，即 G1峰前出現(xiàn)亞二倍體峰（sub-G1）,即細(xì)胞凋亡群。
本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞（懸浮、貼壁）的 DNA 含量（細(xì)胞周期）檢測(cè)。
試劑盒組成：
| 試劑名稱 ? ? ?? | CA1510-20T | CA1510-50T | 保存條件 |
| RNase A | ?2.0mL | ?5.0mL | -20℃ |
| ?PI 染色液 | ?8.0mL | 20.0mL | -20℃避光 |
使用方法：（僅供參考）
1， 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組，并收集細(xì)胞。
2， 用 PBS 洗滌細(xì)胞一次，1500rpm，5min 離心收集，調(diào)整細(xì)胞濃度為 1×10 6 /mL，取 1mL 單細(xì)胞 懸液。
3， 制備的單細(xì)胞懸液離心后，去除上清，在細(xì)胞中加入 70%預(yù)冷乙醇 500μL 固定 2 小時(shí)至過(guò)夜，4℃ 保存，染色前用 PBS 洗去固定液；如需要，細(xì)胞懸液可用 200 目細(xì)胞篩網(wǎng)過(guò)濾一次。
4， 細(xì)胞沉淀中加 100μL RNase A 溶液，重懸細(xì)胞，37℃水浴 30min。
5， 再加入 400μL PI 染色液混勻，4℃避光孵育 30min。
6， 上機(jī)檢測(cè)，記錄激發(fā)波長(zhǎng) 488nm 處紅色熒光。
注意事項(xiàng)：
1. 碘化丙啶（PI）染色液保存和使用過(guò)程中應(yīng)注意避光。
2. PI 有毒，操作時(shí)應(yīng)戴手套，并避免污染。
3. 熒光染料都存在淬滅問(wèn)題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。
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