?Cell Counting Kit-8的基本信息
保存：4℃密封避光保存，有效期一年。
產品簡介：
Cell Counting Kit-8 簡稱CCK-8 試劑盒，為MTT 法的替代方法，是一種基于WST（水溶性四唑鹽，化學
名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的
快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗
使用說明：
一、制作標準曲線（測定細胞具體數量時）
1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞。
2、按比例依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5 個細胞濃度梯度，每組3-6 個復孔。
3、接種后培養至細胞貼壁，然后加CCK-8 試劑培養一定時間后測定OD 值，制作出一條以細胞數量為橫
坐標（X 軸），OD 值為縱坐標（Y 軸）的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量（試用
此標準曲線的前提是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數量以及加入CCK-8 后的培養時間。）
二、細胞活性檢測
1、在96 孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養板放在培養箱中預培養（在37℃,5% CO2 的條件下）。
2、向每孔加入10μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD 值的讀數）。
3、將培養板在培養箱內孵育1-4 小時。
4、用酶標儀測定在450nm 處的吸光度。
5、如果暫時不測定OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M 的HCl 或者1%SDS(W/V)
溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24 小時內吸光度不會發生變化。
三、細胞增值-毒性檢測
1、在96 孔板中配置100 μL 的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24 小時（在37 ℃，5% CO2 的條件下）。
2、向培養板加入10μL 不同濃度的待測物質。在培養箱孵育一段適當的時間（例如：6、12、24 或48 小時）。
3、向每孔加入10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD 值的讀數）。如果待測物質
有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8 之前更換新鮮培養基（除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加
入新的培養基），去掉藥物影響。
4、將培養板在培養箱內孵育1-4 小時。
5、用酶標儀測定在450 nm 處的吸光度。
6、如果暫時不測定OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M 的HCl 或者1%SDS(W/V)
溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24 小時內吸光度不會發生變化。
活力計算：.
細胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[ A(0 加藥)－A(空白)]×100
A（加藥）：具有細胞、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養基和CCK-8 溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A（0 加藥）：具有細胞、CCK-8 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力
注意事項：
①建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK-8 試劑后的培養時間。
②白細胞可能需要培養較長時間。
③當使用標準96 孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1 ,000 個/孔 (100 μL 培養基)。檢測白細胞時的靈敏度
相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 ( 100 μL 培養基)。如果要使用24 孔板或6 孔板實驗，請先計算
每孔相應的接種量，并按照每孔培養基總體積的10% 加入CCK-8 溶液。
④如果沒有450nm 的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之間的濾光片，但是450nm 檢測靈敏度最高。
⑤培養基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。
CCK-8 法與其它檢測方法之間的比較：
?
相關產品：
M1020 MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒
P1020 1×PBS，PH7.2-7.4，0.01M，細胞培養級
H1020 Hanks，含鈣鎂，含酚紅（HBSS）
H2045 EBSS（不含鈣鎂，不含酚紅 ）
12100 DMEM(H)
S9000 特級胎牛血清
P1400 青鏈霉素混合液(100×)