WST-1細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(WST-1 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)是一種廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。
WST-1是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的
formazan(參考圖1)。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。
圖1. WST-1檢測(cè)原理圖 (EC=electron coupling reagent，即電子耦合試劑)
WST-1是MTT的一種升級(jí)替代產(chǎn)品，和MTT或其它MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。首先，MTT被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而WST-1和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-1產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。再次，WST-1比XTT和MTS更加穩(wěn)定，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。另外，WST-1和MTT、XTT等相比，線性范圍更寬，靈敏度更高(參考圖2)。
圖2. WST-1、XTT和MTT的檢測(cè)效果比較 注：450nm為測(cè)定波長(zhǎng)，690nm為參考波長(zhǎng)
本試劑盒可以用于細(xì)胞因子等誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖檢測(cè)，也可以用于抗癌藥物等對(duì)細(xì)胞有毒試劑誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性檢測(cè)，或一些藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制檢測(cè)等。
本試劑盒檢測(cè)非常便捷。無須使用同位素，所有的檢測(cè)步驟僅在同一塊96孔板內(nèi)完成。不必洗滌細(xì)胞，不必收集細(xì)胞，也不必采用額外步驟去溶解formazan。可以用于大批量樣品的檢測(cè)。
酚紅和血清對(duì)本試劑盒的測(cè)定無明顯影響。
WST-1對(duì)細(xì)胞無明顯毒性。加入WST-1顯色后，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板，使檢測(cè)時(shí)間更加靈活，便于找到最佳測(cè)定時(shí)間。
各種細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒的比較和選擇。
本試劑盒可以測(cè)定100個(gè)樣品。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| C0035-1 | WST-1(粉末) | 1管 |
| C0035-2 | 電子耦合試劑 | 1ml |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃避光保存，一年有效。WST-1粉末溶解后，4℃避光可以保存一周，-20℃避光可以保存半年(宜適當(dāng)分裝，盡量避免反復(fù)凍融)。
注意事項(xiàng)：
由于使用96孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面，由于96孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. WST-1溶液的配制：把1毫升電子耦合試劑加入到WST-1粉末中，完全溶解即成WST-1溶液。WST-1溶液4℃避光可保存一周，而不影響使用效果。短期內(nèi)不使用的WST-1溶液，分裝后可以-20℃避光保存半年(盡量避免反復(fù)凍融)。凍存的WST-1溶液溶解后可能會(huì)觀察到一些沉淀物，這是正常現(xiàn)象，37℃水浴孵育2-10 分鐘，通常可以完全溶解。
2. 通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等因素決定)。按照實(shí)驗(yàn)需要，進(jìn)行培養(yǎng)并給予0-10微升特定的藥物刺激。
3. 每孔加入10微升WST-1溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200微升，則需加入20微升WST-1溶液，其它情況以此類推。可以用加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和WST-1溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。
4. 在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育0.5-4小時(shí)，對(duì)于大多數(shù)情況，孵育1-2小時(shí)就可以了。時(shí)間長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，初次實(shí)驗(yàn)時(shí)可以在0.5、1、2和4小時(shí)后分別用酶標(biāo)儀檢測(cè)，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。圖3為HT-1080細(xì)胞在不同時(shí)間測(cè)定的細(xì)胞數(shù)量曲線。
圖3. HT-1080細(xì)胞培養(yǎng)20小時(shí)后，加入WST-1溶液后不同時(shí)間測(cè)得的吸光度。
5. 把96孔板置于搖床上搖動(dòng)一分鐘，以充分混勻待檢測(cè)體系。
6. 在450nm測(cè)定吸光度。如無450nm濾光片，可以使用420-480nm的濾光片。可以使用大于600nm的波長(zhǎng)作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。?