我們可供給您的昆蟲(chóng)宿主細(xì)胞系：
細(xì)胞 | 來(lái)源 | 用途 |
Sf9 | Sf9細(xì)胞系分離自IPLBSF21-AE | 適于轉(zhuǎn)染、純化、生產(chǎn)高滴度病毒、鋪板以及表達(dá)重組蛋白 |
Sf21 | Sf21細(xì)胞衍生于IPLBSF-21細(xì)胞系 | 轉(zhuǎn)染、純化、生產(chǎn)高滴度病毒、鋪板以及表達(dá)重組蛋白。Sf21細(xì)胞在一些結(jié)構(gòu)表達(dá)方面優(yōu)于Sf9細(xì)胞。 |
Hi5 | Hi5細(xì)胞系源于白菜尺蠖卵巢細(xì)胞，粉紋夜蛾細(xì)胞 | 適用于重組病毒顆粒表達(dá)，也常用于轉(zhuǎn)染和空斑純化，且Hi5細(xì)胞系更適合來(lái)表達(dá)分泌型重組蛋白 |
S2 | S2?是一種果蠅晚期胚胎細(xì)胞。其中多為雌性四倍體細(xì)胞，也有雙倍體細(xì)胞 | 比較適合病毒結(jié)構(gòu)蛋白等重組表達(dá) |
主要服務(wù)步驟：
客戶可提供具體的服務(wù)要求，或者由卡梅德生物全權(quán)制備重組蛋白
步驟 | 服務(wù)內(nèi)容 | 時(shí)間 |
亞克隆 | *密碼子優(yōu)化，基因合成（無(wú)基因表達(dá)）；客戶提供質(zhì)粒：擴(kuò)增并抽提含有目標(biāo)基因的載體質(zhì)粒 *拼接序列驗(yàn)證：測(cè)序 *交付：正確構(gòu)建的重組表達(dá)質(zhì)粒及測(cè)序原始報(bào)告 | 2周 |
病毒擴(kuò)大化培養(yǎng) | *重組bacmid DNA擴(kuò)大化培養(yǎng)，并轉(zhuǎn)染昆蟲(chóng)細(xì)胞制備P1和P2病毒stock * P2病毒滴度測(cè)定（滴度108－109），并驗(yàn)證小量蛋白表達(dá) *P3病毒制備（可選，最多可制備3L重組桿狀病毒） 交付：5-10 ml, >107?pfu/ml?病毒及實(shí)驗(yàn)報(bào)告 | 3–4周 |
表達(dá)優(yōu)化及測(cè)試 | *P3病毒貯液轉(zhuǎn)染昆蟲(chóng)細(xì)胞 -?不同的昆蟲(chóng)細(xì)胞系 -?不同的表達(dá)時(shí)間 -?不同的感染復(fù)數(shù)（MOI） *SDS-PAGE及WB分析 交付：圖片，實(shí)驗(yàn)報(bào)告 | 1-2周 |
大規(guī)模重組蛋白表達(dá)及純化 | * 1L (默認(rèn))，5L，10L，30L，80L，130L和250L任選 -?通過(guò)親和，離子交換，疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。 *SDS-PAGE和WB驗(yàn)證蛋白表達(dá) 交付：重組蛋白1~5mg及純化報(bào)告。可按客戶要求提供含純化標(biāo)簽（Tag）或切除純化標(biāo)簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達(dá)90%以上。 | 1–2周 |
我們的服務(wù)優(yōu)勢(shì)：
*密碼子優(yōu)化：包含稀有密碼子分析，蛋白親水性分析和跨膜結(jié)構(gòu)域的預(yù)測(cè)分析
*多種融合標(biāo)簽載體和宿主，以保證高可溶蛋白表達(dá)和高蛋白活性
*多種規(guī)模蛋白發(fā)酵模式：小規(guī)模（500ml，2.5L，10L和30L）、大規(guī)模（80L,130L,250L和500L發(fā)酵罐）
*短時(shí)間內(nèi)制備高純度毫克級(jí)，克級(jí)重組蛋白
*低內(nèi)毒素：LAL檢測(cè)法<0.1EU/ug
*完整的GMP文件支撐體系，保證所有材料、試劑和制備信息可追溯