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elisa試劑盒的基本操作原理

ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，ELISA試劑盒每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，豬ELISA試劑盒從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。禽ELISA試劑盒在實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法ELISA試劑盒價(jià)格以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。上海遠(yuǎn)慕生物-白介素ELISA試劑盒比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。???

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。上海ELISA試劑盒此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。

方法一：用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法：

1.　包被：用0.05M PH9，碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml，在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔）。

3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml，37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。

5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，上海ELISA試劑盒則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。

方法二：用于檢測未知抗體的間接法：

用包被緩沖液ELISA試劑盒將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)，豬ELISA試劑盒洗滌。（同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中，ELISA試劑盒價(jià)格加入新鮮稀釋的酶標(biāo)禽ELISA試劑盒第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30～60分鐘，洗滌，白介素ELISA試劑盒最后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。