??可用于防止PCR產(chǎn)物交叉污染；單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)；位點(diǎn)特異性突變；蛋白質(zhì)與DNA相互作用研究；SNP基因分型；PCR產(chǎn)物克隆；制備含有單鏈突出末端的PCR產(chǎn)物或cDNA等。?
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Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod)，也稱Heat-labile Cod UDG，即熱敏型鱈魚(yú)UDG，是來(lái)源于大西洋鱈魚(yú)(Gadus morhua?cod)，可催化含尿嘧啶的DNA鏈中的尿嘧啶(dU)堿基和脫氧核糖之間的N-糖苷鍵發(fā)生水解，從而釋放游離尿嘧啶。Uracil-DNA Glycosylase (UDG)可以水解含有dU的單鏈或雙鏈DNA，但不能水解RNA或含有dU的長(zhǎng)度不超過(guò)6個(gè)堿基DNA寡聚體。
UDG主要應(yīng)用于消除PCR擴(kuò)增過(guò)程中帶來(lái)的產(chǎn)物污染問(wèn)題。其防止污染的原理為：在PCR反應(yīng)中加入適量的dUTP，以dUTP替代dTTP摻入DNA中，形成含dU堿基的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；后續(xù)進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，使用UDG酶選擇性切割可能被污染而帶入的之前PCR擴(kuò)增產(chǎn)生的含有dU的單鏈或雙鏈DNA，從而避免之前的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物可能的污染對(duì)于本次PCR擴(kuò)增帶來(lái)的負(fù)面影響。
本產(chǎn)品為熱敏型，在50℃孵育10分鐘可以迅速不可逆滅活。在PCR或RT-PCR反應(yīng)前，PCR或RT-PCR體系中加入Heat-labile Cod UDG室溫處理5min，即可充分消除可能的之前的含有dUTP的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。本產(chǎn)品不僅適用于PCR，也適用于qPCR、RT-PCR和qRT-PCR等體系。
活性定義：One unit is the amount of enzyme required to liberate 1 nmol uracil from dU-containing DNA in one hour at 37℃.
Heat-labile Cod UDG酶活性鑒定結(jié)果可參考圖1。
圖1.Heat-labile Cod UDG催化酶解5μl含dU堿基的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物效果圖。使用本產(chǎn)品或國(guó)外N公司的酶，在20μl體系，分別以5μl含dU堿基的PCR擴(kuò)增1500bp PCR產(chǎn)物為底物和不同量的(0U, 0.01U, 0.02U, 0.04U, 0.2U) Heat-labile Cod UDG，在1X Heat-labile Cod UDG Buffer，37℃孵育1h，然后進(jìn)行1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。如圖所示，本產(chǎn)品與N公司相比，具有相當(dāng)?shù)拿富睢, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands))。
?Heat-labile Cod UDG 經(jīng)滅活處理后酶活鑒定結(jié)果可參考圖 2。
圖2.Heat-labile Cod UDG以及生產(chǎn)的E. coli?UDG (D7360)經(jīng)50℃10min處理后，催化酶解5μl含dU堿基的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物效果圖。將不同量的E. coli?UDG (0U, 0.005U, 0.01U, 0.025U)和以及N公司不同量的Heat-labile Cod UDG (0U, 0.02U, 0.04U, 0.2U)經(jīng)50℃ 10min處理之后，在20μl體系，分別以5μl含dU堿基的PCR擴(kuò)增1500bp PCR產(chǎn)物為底物，在1X Heat-labile Cod UDG Buffer，37℃孵育1h，然后進(jìn)行1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。如圖所示，E. coli?UDG50℃處理10min之后酶活僅輕微下降，而Heat-labile Cod UDG均完全滅活。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands))。
來(lái)源：大腸桿菌重組、表達(dá)和純化而獲得。
純度：不含UDG酶活力之外的內(nèi)切或外切脫氧核糖核酸酶、RNase和磷酸酶活性。
用途：去除含尿嘧啶的單鏈或雙鏈DNA；去除含dU的PCR產(chǎn)物氣溶膠污染；DNA修復(fù)與突變檢測(cè)；提高PCR產(chǎn)物的克隆效率；提高點(diǎn)誘變的效率；研究蛋白質(zhì)-DNA相互作用。用于PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、one-step RT-PCR體系。
酶儲(chǔ)存溶液：50mM Tris-HCl (pH 7.5), 100mM NaCl, 0.5mM EDTA, 1mM DTT,?0.1% Triton X-100, 50% (v/v) glycerol。
10X Heat-labile Cod UDG Buffer：700mM Tris-HCl, 100mM NaCl, 10mM EDTA, 1mg/ml BSA, pH 8.0 at 25℃。
失活或抑制：50℃加熱10min可以使Heat-labile Cod UDG完全失活。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| D7364S-1 | Heat-labile Cod UDG (1U/μl) | 200μl |
| D7364S-2 | 10X Heat-labile Cod UDG Buffer | 2ml |
| — | 說(shuō)明書 | 1份 |
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| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| D7364M-1 | Heat-labile Cod UDG (1U/μl) | 1ml |
| D7364M-2 | 10X Heat-labile Cod UDG Buffer | 5ml |
| — | 說(shuō)明書 | 1份 |
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| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| D7364L-1 | Heat-labile Cod UDG (1U/μl) | 5ml |
| D7364L-2 | 10X Heat-labile Cod UDG Buffer | 10ml |
| — | 說(shuō)明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，至少一年有效。
注意事項(xiàng)：
Heat-labile Cod UDG酶在大多數(shù)PCR反應(yīng)緩沖液中均具有活性，但對(duì)于自行使用的PCR或RT-PCR體系，首次使用時(shí)建議先測(cè)試一下是否和所使用的體系兼容。通常取含dUTP的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，參考圖1加入適量UDG，觀察能否有效降解含dUTP的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。
dNTP/dUTP推薦選購(gòu)D7376 dNTP/dUTP Mixture (2.5mM each/5mM)。
Heat-labile Cod UDG長(zhǎng)期儲(chǔ)存請(qǐng)置于-80℃保存，常規(guī)使用請(qǐng)于-20℃保存。-80℃保存會(huì)結(jié)凍，盡量避免反復(fù)凍融。
如果需要將Heat-labile Cod UDG酶應(yīng)用于One-Step RT-PCR或者One-Step qRT-PCR體系，需要選擇耐熱反轉(zhuǎn)錄酶，并需要將逆轉(zhuǎn)錄溫度設(shè)置為50℃-55℃。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說(shuō)明：
1.按照常規(guī)反應(yīng)體系設(shè)置PCR或RT-PCR反應(yīng)體系，同時(shí)加入Heat-labile Cod UDG至最終濃度為0.01U/μl，混勻。通常僅加入PCR或RT-PCR的buffer即可，無(wú)需加入U(xiǎn)DG的buffer。
2.25℃孵育5min (去除可能的含dUTP的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的污染)，隨后進(jìn)入PCR或RT-PCR程序。?
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