血漿游離血紅蛋白測(cè)定方法
ELISA試劑盒分析：血漿游離血紅蛋白測(cè)定方法
實(shí)驗(yàn)原理
血紅蛋白具有類過(guò)氧化物酶活性，可催化H2O2釋放新生態(tài)氧，使鄰甲聯(lián)苯胺氧化發(fā)生顏色變化，由無(wú)色最終變?yōu)樗{(lán)紫色。根據(jù)顯色深淺與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，可測(cè)出其含量。
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實(shí)驗(yàn)方法
材料：
1．2g/L鄰甲聯(lián)苯胺溶液
2．1%H2O2
3．10%醋酸溶液
4．分光光度計(jì)
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方法：
1.抽取靜脈血2-3ml，枸櫞酸鈉抗凝，離心分離血漿。
2．按下表進(jìn)行操作，用分光光度計(jì)，波長(zhǎng)為530nm，以空白管調(diào)零，測(cè)定測(cè)定管的吸光度。
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試劑 （ml）
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測(cè)定管
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空白管
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2 g/L鄰甲聯(lián)苯胺溶液
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0.5
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0.5
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患者血漿
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0.02
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/
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1% H2O2
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0.5
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0.5
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混勻后室溫放置10min
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10%醋酸溶液
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5.0
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5.0
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室溫放置10min
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3.計(jì)算公式
血漿游離Hb（mg/L）=測(cè)定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度×100
實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算
參考范圍：0-40mg/L
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注意事項(xiàng)
1.一切容器避免血紅蛋白污染；
2.采血要順利，器皿要干燥，檢測(cè)血漿要新鮮，及時(shí)分離，防止人為溶血；
3.鄰聯(lián)苯胺溶液具致癌性，檢測(cè)時(shí)要小心，廢液要妥善處理，以免污染；
4.雙氧水要新鮮配置，濃度要準(zhǔn)確