?人 IL-10(高靈敏) Elisa Kit

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背景介紹：

白介素10是一種多細(xì)胞源、多功能的細(xì)胞因子,調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長與分化,參與炎性反應(yīng)和免疫反應(yīng),是目前公認(rèn)的炎癥與免疫抑制因子。在腫瘤、感染、器官移植、造血系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用,與血液、消化、尤其是心血管系統(tǒng)疾病密切相關(guān)。在1989年，Mosmannand及他們的同事描述了一種新的免疫介質(zhì)，由Th2細(xì)胞克隆分泌，能夠抑制Th1細(xì)胞克隆IL-2和IFN-γ的合成。早期被命名為細(xì)胞因子合成抑制因子(CSIF)，這種因子后來被命名為IL-10，在這被發(fā)現(xiàn)的21年期間，很多研究深入剖析了這個(gè)細(xì)胞因子的生物學(xué)特性，人類IL-10基因位于1號染色體上，包括總共5.1kb的序列包含5個(gè)外顯子，IL-10基因的啟動子中有很多的SNP位點(diǎn)，一些證據(jù)表明這些基因多態(tài)性在體外會影響IL-10的表達(dá)，IL-10基因由178個(gè)氨基酸組成蛋白質(zhì)，分泌時(shí)會被切去18個(gè)氨基酸的信號肽，人類和鼠類的IL-10約有75%的氨基酸序列是一致的。

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檢測原理：

Solarbio (Solarbio ?)?ELISA試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。將抗人IL-10單克隆抗體包被在酶標(biāo)板上；分別加入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和預(yù)稀釋的樣本，標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的人IL-10會與酶標(biāo)板上的包被抗體充分結(jié)合；洗板后加入生物素化抗人IL-10抗體，該抗體會與板子上包被抗體捕獲的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的人IL-10發(fā)生特異性結(jié)合；洗板后加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，生物素與鏈霉親和素會發(fā)生高強(qiáng)度的非共價(jià)結(jié)合；洗板后加入顯色劑底物TMB，若反應(yīng)孔中樣品存在不同濃度的人IL-10，則HRP會使無色TMB變成不同深淺（正相關(guān)）的藍(lán)色物質(zhì)，加入終止液后反應(yīng)孔會變成黃色；最后，在λmax=450 nm（OD=450 nm）處測定反應(yīng)孔樣品吸光度（OD），樣本中的人IL-10濃度與OD成正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計(jì)算出樣本中人IL-10的濃度。

原理圖：
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注意事項(xiàng)：

1.?試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。

2.?試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請丟棄。

3.?試劑盒使用前請在室溫恢復(fù)30min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。

4.?在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。

5.?為避免交叉污染，請?jiān)谠囼?yàn)中使用1次性試管，槍頭，封板膜（※）及潔凈塑料容器。.

6.?濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運(yùn)輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，

使用前請離心處理（5-10 S即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時(shí)，請用移液器小心吹打幾次。

7.?除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的

??試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。

8.?為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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安全提示：

試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時(shí)請帶上手套并注意防護(hù)；在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸，請用大量清水清洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時(shí)，請按國家生物實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。

試劑盒組成及儲存：

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自備實(shí)驗(yàn)器材（不提供，可代購）

1．?酶標(biāo)儀（主波長450nm，參考波長630nm）

2．?高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl

3．?洗板機(jī)或洗瓶

4．?37℃孵育箱

5．?雙蒸水，去離子水，量筒等

6．?稀釋用聚丙烯試管

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樣本收集及儲存：

1.?細(xì)胞培養(yǎng)上清：

將細(xì)胞培養(yǎng)基移至無菌離心管，在4℃條件下1000?×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時(shí)內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存），避免反復(fù)凍融。

2.?血清樣本：

室溫血液自然凝固20 min后，在4℃條件下1000×g離心10 min，然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時(shí)內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存），保存過程中如有沉淀，請?jiān)俅坞x心，避免反復(fù)凍融。

3.?血漿樣本：

將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際要求選擇EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合20 min，在4℃條件下1000×g離心10 min，然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存（24小時(shí)內(nèi)檢測可放入2-8℃儲存），避免反復(fù)凍融。

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※注意：血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本，以免影響檢測結(jié)果；如果樣本中的靶標(biāo)物檢測濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品的最高值，請將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測，建議正式實(shí)驗(yàn)前做預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定稀釋倍數(shù)。

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試劑準(zhǔn)備：

1.?試劑回溫：首先在實(shí)驗(yàn)前30 min將試劑盒，待測樣本放置于室溫下，濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶，請放入37℃?溫浴直到結(jié)晶全部溶解。

2.?配制洗滌液：預(yù)先計(jì)算好稀釋后的洗滌液使用體積，然后用雙蒸水或去離子水將20倍濃縮洗滌液稀釋成1倍應(yīng)用液，未用完的濃縮洗滌液放入4℃冰箱保存。

3.?標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋：加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液（SR1）1ml至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，靜置15分鐘待其完全溶解后輕輕混勻(濃度為2000pg/ml)，然后按照以下濃度：40(20ul復(fù)溶好的標(biāo)準(zhǔn)品原液+980ul標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液）、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0pg/ml進(jìn)行稀釋，40pg/ml為標(biāo)準(zhǔn)曲線最高點(diǎn)濃度，標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液（SR1）作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的零點(diǎn)（0pg/ml）。復(fù)溶過的標(biāo)準(zhǔn)品原液（2000pg/ml）未用完的應(yīng)廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝，并