產(chǎn)品簡介
本產(chǎn)品是一種高效、穩(wěn)定、快速并可以去除基因組DNA 污染的反轉(zhuǎn)錄預(yù)混Mix。5× FastKing-RT SuperMix 中不但含有RTPCR中反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的所有試劑，還含有高效去除基因組DNA 的熱敏gDNase。FastKing RT Enzyme 是通過分子改造后的新型反轉(zhuǎn)錄酶，在通讀GC 含量高，二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA 模板和抗逆性等方面的表現(xiàn)突出；熱敏的gDNase 生效快，效率高，作用時(shí)間短，在處理殘留基因組DNA 之后不會(huì)對cDNA 造成影響。二者結(jié)合使用，可使殘留基因組的去除與反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)同時(shí)進(jìn)行，極大方便了反轉(zhuǎn)錄操作。
產(chǎn)品特點(diǎn)
■ 快速：僅需加入模板，18 分鐘一步法完成去基因組和高效反轉(zhuǎn)錄
■ 高效：修飾了疏水motif，反轉(zhuǎn)效率超過95%
■ 靈敏：低至1 ng 的模板也能被準(zhǔn)確識(shí)別
■ 簡潔：采用熱敏DNase，見效快，效率高，時(shí)間短，不會(huì)對cDNA 產(chǎn)生影響
下游應(yīng)用
反轉(zhuǎn)錄后的cDNA 可用于常規(guī)PCR，熒光定量PCR，cDNA 文庫構(gòu)建，
SAGE（基因表達(dá)連續(xù)分析），引物延伸等多種常規(guī)實(shí)驗(yàn)。
適用范圍
RT-PCR；熒光定量RT-PCR；cDNA文庫構(gòu)建；SAGE(基因表達(dá)連續(xù)分析)；引物延伸。
實(shí)驗(yàn)例
實(shí)驗(yàn)例 1. 分別使用 TIANGEN KR118、國外 A 公司和國內(nèi) B 公司的一步法反轉(zhuǎn)定量試劑合成cDNA，使用 TIANGEN FP209檢測小鼠 RN5 基因，展示擴(kuò)增曲線、熔解曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示，TIANGEN KR118 反轉(zhuǎn)錄得到的 cDNA 量大，擴(kuò)增 Ct靠前，特異性高，梯度優(yōu)秀，特別對于低豐度模板的檢測優(yōu)于其他競爭試劑。
實(shí)驗(yàn)例 2. 分別使用 TIANGEN KR118、國外 A 公司和國內(nèi) B 公司的一步法反轉(zhuǎn)定量試劑合成 cDNA，使用 TIANGEN FP209 檢測人類 HsG 基因，并且人為添加不同濃度的基因組 DNA，檢測不同試劑對基因組 DNA 的去除能力。Ct 結(jié)果顯示，TIANGEN KR118 具有優(yōu)秀的基因組 DNA 去除能力，多至 500 ng 的基因組 DNA 殘留也能有效去除，不會(huì)對結(jié)果造成影響。ND：未檢出。NRT：不做反轉(zhuǎn)錄，直接用混合物定量檢測。